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产品描述:

产品名称:超纯小RNA快速提取试剂盒

描述: 本产品为small RNA提取而开发的新一代产品,可用于各种样本(细胞、动物组织、植物组织等)中small RNA的提取,也可用于total RNA的提取。该试剂盒中的裂解液针对small RNA提取进行了优化,具有较强的裂解能力和灵敏度。专门研制的吸附柱采用玻璃纤维素膜,大大增强了small RNA(<200 nt)结合效率。每个吸附柱每次可处理30-50 mg动物组织、100 mg植物组织或1×10⁷细胞。得到的small RNA纯度更好,质量更高,1 h内即可完成所有操作。提取的RNA没有DNA和蛋白污染,可用于Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
产品信息:

使用方法: 实验准备: 1、需自备的材料:氯仿。 2、第一次使用前请按瓶标在漂洗液 1(WB1)和漂洗液 2(WB2)中加入无水乙醇,并做好标记。 操作步骤: 对 small RNA 的纯度要求较高时,比如在研究 miRNA 芯片、miRNA 克隆时建议采用此方法。 1、柱平衡步骤:向吸附柱和small RNA吸附柱中(吸附柱放入收集管中)分别加入500 μl柱平衡液,12,000 rpm离心2 min, 弃除收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子) 2、样品处理: (1)动植物组织:将组织在液氮中磨碎,每30-50 mg动物组织或者100 mg植物组织加1 ml裂解液,用匀浆仪进行匀浆 处理。样品体积不应超过裂解液体积的1/10。 (2)单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每10 cm2面积加1 ml裂解液,用取样器吹打几次。 注:裂解液的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。 (3)细胞悬液:400×g离心5 min收取细胞,弃上清。加入1 ml裂解液,振荡器振荡或移液器吸打数次混匀。加裂解液前 不要洗涤细胞,以免降解RNA。 3、将匀浆样品在室温放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。 4、4℃ 12,000 rpm离心5 min,取上清转入一个新的RNase-free离心管中(可选)。 注:如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物部分等,可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量 DNA,RNA存在于上清溶液中。 5、加入200 μl氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 s,室温放置5 min 。 6、4℃ 12,000 rpm离心15 min,样品会分成三层:粉色的有机相,中间层和无色的水相,RNA主要在水相中,水相的体 积约为所用裂解液的50%。把水相转移到新管中,进行下一步操作。 7、量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积0.43倍的无水乙醇(如500 μl的转移液加215 μl无水乙醇),混匀(此时可能 会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中,室温 12,000 rpm离心30 s,若一次不能将全部溶液和混合物 加入向吸附柱中,请分两次转入,离心后弃掉吸附柱,保留流出液。 8、量取流出液的体积,缓慢加入流出液体积0.75倍的无水乙醇(如700 μl的流出液加525 μl无水乙醇),混匀(此时可能 会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入small RNA吸附柱中,室温12,000 rpm离心30 s,若一次不能将全部溶液 和混合物加入吸附柱中,请分两次转入,离心后弃掉流出液,保留吸附柱。 9、向吸附柱中加入500 μl漂洗液1(WB1)(请先检查是否已加入乙醇),室温12,000 rpm离心 30 s,弃废液。 10、向吸附柱中加入500 μl漂洗液2(WB2)(请先检查是否已加入乙醇),室温12,000 rpm 离心 30 s,弃废液。 11、重复操作步骤10一次。 12、将吸附柱放入2 ml收集管中,室温12,000 rpm离心3 min,去除残余液体。 13、将吸附柱转入一个新的 1.5 ml RNase-free离心管中,加30 μl RNase-free ddH2O,室温放置1 min,12,000 rpm 离心1 min。所得的small RNA溶液请立即使用或适量分装后放置在-80℃保存。 注:RNase-free ddH2O体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次。 补充说明: 本试剂盒也可用于 total RNA 的提取,提取的 total RNA 中含有各种 small RNA。对 small RNA 的纯度要求不高时,比如 用于 RT-PCR、Northern blot 时也可以采用此方法。 1、按操作步骤1-6进行操作。 2、量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积1.5倍的无水乙醇(如500 μl的转移液加入750 μl无水乙醇),混匀(此时可能 会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中,室温12,000 rpm离心 30 s,若一次不能将全部溶液和混合物加 入吸附柱,请分两次转入,离心后弃掉流出液,保留吸附柱。 3、向吸附柱中加入500 μl漂洗液1(WB1)(请先检查是否已加入乙醇),室温12,000 rpm离心30 s,弃废液。 4、向吸附柱中加入500 μl漂洗液2(WB2)(请先检查是否已加入乙醇),室温12,000 rpm 离心30 s,弃废液。 5、重复补充说明4一次。 6、将吸附柱放入2 ml收集管中,室温12,000 rpm离心3 min,去除残余液体。 7、将吸附柱转入一个新的1.5 ml RNase-free离心管中,加30-100 μl RNase-free ddH2O,室温放置1 min,12,000 rpm离心1 min得到RNA溶液。所得的RNA溶液应立即使用或适量分装后放置在-80℃保存。 注:洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次。

储存/保存方法: 常温保存,其中裂解液4℃保存,保质期12个月。

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