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产品描述:

产品名称:BL21(DE3)感受态细胞

描述:

本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达10⁶~10⁷cfu/μg DNA,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
基因型:
F-ompT hsdS(rB-mB-)gal dcm(DE3)
产品特点:
1、BL21(DE3)感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主;
2、T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区域整合于BL21的染色体上;
3、该菌株适合于非毒性蛋白的表达;
4、质量稳定,使用方便,质优价廉。

使用方法: 1、从-70℃冰箱取出BL21(DE3)感受态细胞,迅速放入冰水,使其融化。(一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。)以下实验以 50μl 感受态细胞为例。2、取一无菌的1.5mL EP管,向其中加入1μl质粒+39μl ddH2O+10μl 5×KCM。(具体的DNA及ddH2O的加入量可根据实际情况调整)3、取50μl 感受态细胞悬液加入上述EP管中,轻轻混匀,置于冰水中冰浴20min。4、28℃再孵育10min。5、无菌条件下,加入500μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃,150rpm,摇床振荡培养60min。6、无菌条件下,取适量菌液加到含相应抗生素的LB 固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后,将平板倒置于37℃恒温箱培养12-16 小时。(涂布用量可根据具体实验来调整。90mm 平皿涂布100μl,55mm 平皿涂布50μl)7、保留剩余的菌液于4℃冰箱中,视平板上菌落生长情况决定去留。1、5×KCM:0.5M KCl,0.15M CaCl2,0.25M MgCl2,121℃高压灭菌20min。2、IPTG:称取1.9g IPTG(MW=238.31)充分溶解于40 ml灭菌水,浓度为200mM。用无菌0.22μm滤膜过滤除菌。小份分装后,-20℃保存。3、X-gal:用 DMF(二甲基甲酰胺)配制成20mg/ml,小份分装后,-20℃避光保存。4、LB液体培养基:称取 10g Tryptone, 5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去离子水,完全溶解后用 2M 的 NaOH 溶液调节 pH 值至7.0。加去离子水定容至1L。分装后,121℃高压灭菌 20 分钟。5、LB固体选择培养基:100ml LB液体培养基中加入1.5g琼脂粉,摇匀后,121℃高压灭菌 20 分钟。冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素,混匀后倒在无菌培养皿中,等琼脂凝固后即可使用。

储存/保存方法: -70℃保存,避免反复冻融

注意事项: 1、感受态细胞应在-70℃下保存,不可多次冻融,也不可放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2、不适合在液氮中保存。
3、感受态细胞应在冰上融化。
4、转化高浓度质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5、所有步骤都应在无菌条件下进行。

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