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产品描述:

产品名称:游离DNA提取试剂盒

别名: Circulating Cell-free DNA Isolation Kit

描述: 试剂盒组分:

使用方法: 自备试剂:无水乙醇、异丙醇、PBS或生理盐水自备仪器及耗材:1、台式离心机(适用1.5 mL离心管,离心力可达13000g以上)2、离心机(适用15 mL离心管,离心力可达2500g以上)3、水浴锅4、真空泵5、真空收集器(推荐使用QIAGEN公司的QIAvac 24 Plus vacuum manifold,货号:19413)6、干净1.5 mL离心管一、游离DNA提取前准备工作:1、样本准备:本试剂盒可用于提取3.0 ~ 5.0 mL体积血浆中的游离DNA。(1)如果血浆体积2.0 ~ 3.0 mL,则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至3.0 mL。(2)如果血浆体积3.0 ~ 4.0 mL,则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至4.0 mL。(3)如果血浆体积4.0 ~ 5.0 mL,则用缓冲液PBS或生理盐水补齐至5.0 mL。2、试剂准备:(1)Buffer W1(浓缩液),使用前需补加25 mL无水乙醇,充分混匀,并在瓶上作好标记。(2)Buffer W2(浓缩液),使用前需补加80 mL无水乙醇,充分混匀,并在瓶上作好标记。二、游离DNA提取操作步骤:1、血浆样本准备好后,小心转移至15 mL离心管。2、根据待提取血浆体积大小,分别向15 mL离心管加入相应比例的Buffer PL(1×血浆样本体积)和100ul 蛋白酶K溶液:(1)3.0 mL血浆样本加入3.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。(2)4.0 mL血浆样本加入4.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。(3)5.0 mL血浆样本加入5.0 mL Buffer PL和100ul蛋白酶K溶液。然后颠倒混匀15 ~ 20次,确保充分混匀(需注意拧紧盖子,防止后续孵育过程液体渗出,造成样本交叉污染)。3、放置水浴锅中,56 ℃ 孵育30分钟,注意水浴锅的水位应高于15 mL离心管中液面。在上述步骤孵育过程中,将真空泵和真空收集器连接好,然后根据样本数将相应的连接器插入真空收集器的小孔中,再依次插上DNA纯化柱和储液管,DNA纯化柱收集管留着备用,整个装置确保紧密连接不漏气(取出DNA纯化柱后,需将包装剩余DNA纯化柱的自封袋密封严实,防止温湿度剧烈变化而导致DNA得率的降低)。4、步骤3结束后将样本取出,在25 ℃条件下2500g离心10秒钟。根据样本体积加入相应体积的异丙醇(0.5×血浆样本体积):(1)3.0 mL血浆样本加入1.5 mL异丙醇。(2)4.0 mL血浆样本加入2.0 mL异丙醇。(3)5.0 mL血浆样本加入2.5 mL异丙醇。然后颠倒混匀15 ~ 20次,一定要确保充分混匀,在25℃条件下2500g离心10秒钟(加入异丙醇后,不需要置于冰水浴中孵育)。5、短暂离心后,小心将裂解后样本转入已连接好的储液管中,打开真空泵,将负压控制在 - 0.08 MPa ~ - 0.1 MPa范围内,使液体平缓流过DNA纯化柱,整个过程应观察有无液体渗漏,防止损失和交叉污染。6、待所有液体穿过DNA纯化柱后,关真空泵,小心将储液管拆下并丢弃。7、保持DNA纯化柱开盖状态,加入600ul Buffer W1,开真空泵,待所有液体流过DNA纯化柱,关真空泵。8、重复步骤7。9、保持DNA纯化柱开盖状态,加入800ul Buffer W2,开真空泵,使所有液体流过DNA纯化柱,关真空泵。10、保持DNA纯化柱开盖状态,然后小心的将DNA纯化柱拆下并放入步骤4留下的收集管中,加入800ul Buffer W2,盖紧盖子,颠倒2 ~ 3次后,25 ℃,13000g离心1分钟。11、将上述步骤DNA纯化柱取出,转入新收集管,在25 ℃,13000g离心3分钟。12、将DNA纯化柱小心取出,转入新收集管,然后小心揭开纯化柱盖子,向纯化柱中央加入50 ~ 100ul Buffer ES(提取多个样本时,每个样本加入Buffer ES后需更换滤芯枪头,防止样本的交叉污染),室温放置3分钟。13、13000g离心1分钟,收集到的液体即为提取后的血浆游离DNA,将DNA样本转入1.5 mL离心管中。如果24小时内需要使用样本,2 ~ 8℃保存即可,长期保存需放置于低于 -15℃冰箱中。三、血浆核酸沉淀纯化:无需沉淀

储存/保存方法: 本试剂盒除蛋白酶K外,应储存于室温,干燥阴凉处,有效期为12个月。 蛋白酶K溶液储存于-20℃,可根据需要分装保存,避免反复冻融。

产品用途: 本试剂盒可从血浆中高效提取高纯度游离DNA(cell-free DNA),用于后续相关PCR、next-generation sequencing(NGS)等分子生物学检测。

注意事项: 1、使用本产品前应仔细阅读说明书。
2、试剂盒中组份Buffer PL和Buffer W1(浓缩液)含有胍盐等有害物质,操作时需做好安全防护工作。
3、试剂盒中组份Buffer PL 和 Buffer W1(浓缩液)中若发现少许颗粒物,不影响使用。
4、试剂盒使用前应确保Buffer W1(浓缩液)和Buffer W2(浓缩液)已补加相应体积的无水乙醇,不能用70%乙醇替代,并充分混匀。
5、核酸洗脱液Buffer ES不建议用纯水替代。
6、建议洗脱体积为50 ~ 100 μL,洗脱体积不能低于30 μL,当用30 ~ 50 μL洗脱时,需保证洗脱液加到吸附柱的正中央,当低于50 μL洗脱时,可能导致回收率偏低。

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