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产品描述:

产品名称:sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit

描述:

CRISPR/Cas9是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导Cas9蛋白对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR/Cas9的切割是通过向导RNA(gRNA)与打靶基因组位置之间~20bp碱基的配对,且打靶序列的3′端需要有PAM结构(NGG),再引导Cas9作用实现的。CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性主要依赖于gRNA与靠近PAM处10-12bp碱基的配对,而其余远离PAM处8~10bp碱基的错配对靶位点的识别影响不明显,这导致了CRISPR/Cas9存在一定的脱靶性,可能发生非特异性切割,引起基因组非靶向位点的突变,这样会造成研究结果的不确定性以及研究工作量的大量增加。

CRISPR/Cas9基因编辑系统能有效解决这一问题。sgRNA体外转录试剂盒(abs60162)能体外高效转录不同的sgRNA片段,进一步通过sgRNA体外筛选试剂盒(abs60161)筛选出高效率的sgRNA,用于后续科研实验。
产品组分:

实验方法:

提取基因组DNA,设计引物使用2×Amplification Mix PCR扩增得到含有编辑位点的目的片段后进行体外切割。

体外切割系(20μl):

37°C反应1h,70°C加热10min终止反应。琼脂糖胶电泳检测。

储存/保存方法: -20℃保存,或-80℃长期保存。

产品用途: 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除; 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入; sgRNA 剪切靶点 DNA 的效率检测,降低体内筛选成本; 体外剪切靶 DNA 的特异位点; DNA 编辑后基因型鉴定。

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