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产品描述:

产品名称:NovoBiotin Competent E.coli

描述: Biotin修饰的蛋白质是用于蛋白质相互作用研究中的有力工具,通过目标蛋白融合表达Avi Tag,可实现位点特异性的Biotin修饰,可最大限度的减少对蛋白质活性的影响。Avi Tag的Biotin修饰可以在体内或体外(Avi-Biotinylation   Kit,Cat.No:PE013)进行。NovoBiotin   Competent Cell是含有高表达Avi Tag生物素化酶的BL21(DE3)感受态细胞。配合使用pNovoAvi-C(Cat.No:V104)载体可获得最佳生物素修饰效果。 
注意:宿主菌为氯霉素抗性。

产品特点:

高效表达Avi Tag生物素化酶;

实现目标蛋白Biotin修饰。
产品组分:

实验方法:

(1)取感受态细胞置于冰浴中,一次转化感受态细胞的用量为 50-100ul,可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。

(2)待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(通常 100ul 感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液枪吹打混合,冰上放置30 分钟。

(3)将离心管置于 42℃水浴中,热击 60-90 秒,迅速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。

(4)向每个离心管中加入 500ul 无菌不含抗生素的LB 或 SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45分钟,使质粒上相关抗性基因表达,菌体复苏。

(5)吸取 200ul 已转化的感受态细胞,加到含氯霉素和质粒上相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置培养 12~16 小时。涂布量应根据具体实验调整,如果转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板,如果预计的克隆数较少,可 3000rpm 离心 5 分钟,吸取部分培养基,悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存,如果第二日转化菌落数过少,可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。

储存/保存方法: -80℃

技术指标:

基因型:E.coli BL21(DE3)来源于 B 株,为 Lon 蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。

转化效率:使用pUC19质粒检测,转化效率≥1×10⁶cfu/ug。

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