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产品描述:

产品名称:Single Cell Whole Genome Amplification Kit

描述:

单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系,Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性,可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性,保真度高于绝大多数高保真酶,因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。

本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量,如果以DNA样品为模板,需避免使用降解的DNA作为起始模板。 

产品特点:

高覆盖度:经过扩增后可达到95%以上的覆盖度。

高均一度:无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增。

高保真:具有很强的校正功能,保真度高。

高灵敏:可实现从单个细胞样本的全基因组扩增。
产品组分:

实验方法:

适用于以 1-1000 个新鲜配制的细胞样品作为模板,以保证起始基因组的完整性。

(1)将细胞用 PBS 洗涤三次。

(2)取一倍体积的细胞,加入一倍体积的 Cell Lysis Buffer,轻轻混匀(勿涡旋混匀)后置于冰上放置 10min。

(3)加入一倍体积的 Neutralization  Buffer,轻轻混匀,勿涡旋混匀。

(4)从上述混合液中取 3μl 样品,加入 7μl 无菌水,10μl Reaction Buffer。如果不进行后续反应,需冰上放置。

将 20μl 上 述 处 理 后 的 样 品 加 入 到 25μl GenomiPhi Buffer 中。

(5)加入 5μl GenomiPhi29 Enzyme,30℃反应3h。

(6)65℃,10min 失活 GenomiPhi29 Enzyme。

(7)扩增产物是高浓度基因组 DNA,需要将扩增产物用无菌水或者 TE 缓冲液进行稀释后进行下游实验。

储存/保存方法: -20℃

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