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产品描述:

产品名称:2×Fast Pfu Master Mix(Quick Load)

描述:

本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3x10^-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间,非常适用于1-20kb长片段的扩增。

产品特点:

高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。

灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。

快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上,可在较短时间内获得高产量的PCR产物。

快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。

实验方法:

常用反应体系(50μl):

*Mg ²⁺终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K;

当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);

使用建议:

Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3′端"A"突出,除使用PCR一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有:

(1)PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

(2)将产物3′末端加A后再与T载体连接。

(3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

储存/保存方法: -20℃ 有效期12个月

技术指标:

经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

产品用途: 用于要求保真度比较高,扩增长度较长的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

注意事项: (1)需溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
(2)对高 GC 含量模板,建议将变性温度提高到98℃。
(3)对于高 GC 模板,建议配套使用 PCR 万能增强剂 I或者添加终浓度为 5%-8% DMSO。

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