公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!

产品描述:

产品名称:2×Pfu Master Mix

描述:

本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。

产品特点:

高保真:Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。

灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。

快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。

实验方法:

常用反应体系(50μl):

*Mg ²⁺终浓度为2mM

常用PCR循环:

当扩增片段<3K;

当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);

使用建议:

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3′端"A"突出,除使用PCR一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有:

(1)PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

(2)将产物3′末端加A后再与T载体连接。

(3)由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

储存/保存方法: -20℃

技术指标:

经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

产品用途: 用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

注意事项: 1、需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
2、应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足。循环数过多,扩增量增加,但突变率会增加,并造成非特异性扩增。
3、根据引物Tm值设置合适的退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增。退火温度过高,可能扩增不到目的条带。

产品信息订购:

产品更多信息请进入爱必信网站咨询