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产品描述:

产品名称:2×Pfu Master Mix(Quick Load)

描述:

本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。

产品特点:

高保真:Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。

灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例一)。

快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。

使用方法: 1、PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。2、将产物3′末端加A后再与T载体连接。3、由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20~30mers。另外为了减少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

储存/保存方法: -20℃

产品用途: 用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

注意事项: 1、需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
2、应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足。循环数过多,扩增量增加,但突变率会增加,并造成非特异性扩增。
3、根据引物Tm值设置合适的退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增。退火温度过高,可能扩增不到目的条带。

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