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产品描述:

产品名称:Trizol

描述: Trizol是细胞或组织总RNA抽提试剂。本产品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法,抽提的方法和步骤完全相同。
Trizol的颜色和TRIzol相同,加入氯仿后上层呈无色,下层呈红色,便于吸取上层水相。
Trizol对动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提均适用。
Trizol抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。
裂解细胞或和组织共匀浆时,Trizol可以保持样品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。
每一百万细胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA;每毫克组织用Trizol抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protectionassay,cDNA克隆,以及RTPCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

别名: 总RNA提取试剂(Trizol试剂)

使用方法: 

1. 细胞裂解组织样本: 

Trizol用量:每 50-100 mg 组织加 1 ml Trizol,样品体积不应超过 Trizol 体积的 10%。 

1) 将动物或植物组织切成小块,在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理。 

2) 将研磨好的组织粉末快速转入装有 1 ml Trizol 的 2 ml 离心管中,在涡旋振荡器上迅速振荡混匀,置于冰上, 待所有的样品研磨完。 

3) 裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物部位等,匀浆后仍会存留有不溶物质,可于 4℃ 12,000 x g 离心 10 min,然后吸取上清至一新的离心管中。 

细胞样本: 

1) 贴壁细胞:吸尽培养液,每 10 cm2培养面积(6 孔板单孔或 35 mm 平皿)加入 1 ml Trizol,用加样器吹打数 次,以确保细胞完全裂解,然后转移至离心管中。 

注 : Trizol 的 使 用 量 应 由 培 养 皿 表 面 积 决 定 , 而 非 由 细 胞 数 目 决 定 。 Trizol 量 不 足 可 能 导 致 提 取 的 RNA 中 有 DNA 污 染 。 

2) 悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每 5-10×106动植物或酵母细胞,或每 1×107细菌细胞加入 1ml Trizol, 用加样器吹打,使其完全裂解,然后转移至离心管中。 注 : 添 加 Trizol 前 切 勿 洗 涤 细 胞 , 以 免 RNA 降 解 。 必 要 时 可 以 用 匀 浆 器 来 裂 解 某 些 细 菌 或 者 酵 母 细 胞 。

2. 液相分离 

1) 裂解产物于室温放置 5 min,使核酸-蛋白复合物完全分离。 (注:此时样品可在-80℃长期保存。 ) 

2) 每 1 ml Trizol 加入 0.2 ml 氯仿,盖紧管盖,剧烈振荡 15 s,室温放置 2-3 min。 

3) 4℃ 12,000 x g 离心 15 min,样品会分成三层:桔黄色的下层有机相,中间层和无色的上层水相。 

4) 吸取含总 RNA 的上层水相至一新的离心管中,吸取水相的体积为所用 Trizol 试剂的 60%。 

3. RNA 回收 

1) 按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 0.5 ml 异丙醇,颠倒数次混匀,室温放置 10 min。 

2) 4℃ 12,000 x g 离心 10 min,弃除上清,可见胶状的 RNA 沉淀。 

3) 按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 1 ml 75%乙醇,颠倒数次混匀,洗涤沉淀。 

4) 4℃ 12,000 x g 离心 5 min,弃除上清。 

5) 室温倒置 5-10 min 晾干或真空抽干(不要使用真空干燥离心机,以免 RNA 过干,难以溶解) 。 

6) 加入适量(如 25ul) DEPC-ddH2O 或 TE 缓冲液,用加样器吹打数次溶解 RNA。 

7) 通过 RNA 电泳以及紫外分光光度计检测,确定 RNA 的浓度、纯度和完整性。 

8) 所得的 RNA 应立即使用或适量分装后-80℃保存,避免反复冻融。

储存/保存方法: 4℃避光密闭保存,保质期12个月

注意事项:

1、如果需要测量 RNA 的 A260/A280 的比值,建议使用 RNA 定量缓冲液对样品稀释后,进行测量。 

2、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无 RNA 酶污染。耐高温器物可 180℃烘烤 4 小时以去除RNA 酶,其它器物去除 RNA 酶可考虑用 0.01%的 DEPC 水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用 DEPC 水配制。加 0.01% DEPC 至重蒸水或 MiliQ 级水中,处理过夜,灭菌即成 DEPC 水。 

3、使用冻存的细胞或组织抽提总 RNA 的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的 RNase 会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽 RNA, 推荐先加入适量 Trizol,并裂解样品后冻存。 

4、必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着 RNA 样品呼气或说话,以防 RNA 酶污染。建议戴一次性口罩操作。 

5、Trizol 含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触 Trizol,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。 

6、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。

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