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产品描述:

产品名称:全血基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将物、蛋白等杂质去除, 低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1、简单快速:1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
2、超纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。
自备试剂:无水乙醇、异丙醇
产品信息:

使用方法: 提示: 次使用前请先在漂洗液 WB 中加入量无水乙醇,充分混匀, 加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 操作:1、处理血液材料(本产品适用于处理已添加抗凝剂的 100μl-1ml 血液样品); a、当血液样品体积小于 200μl 时,可加缓冲液 BB 补足至 200μl,再进行下一步实 验(如血液样品体积为 200μl,可直接进行下一步实验,不需加入 BB) b、当血液样品体积超过 200μl 时,需用裂解液 RBC 处理,具体步骤如下: 在样品中加入 1-3 倍体积的裂解液 RBC,颠倒混匀,室温放置 10min,1,2000rpm 离心 20sec,吸去上清,留下细胞核沉淀(如果裂解不 ,可以重复以上步 骤一次),向离心收集到的细胞核沉淀中加 200μl 缓冲液 BB,振荡至 混匀。 c、如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类活更低级生物的抗凝血液,其红细胞为 有核细胞,因此处理量 5-20μl,可加缓冲液 BB 补足 200μl 后进行下面裂解步 骤。 注意:如果需要去除 RNA,可加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液,振荡 15sec, 室温放置 5min。 2、加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入 200μl 结合液 CB,立刻 涡旋振荡充分混匀,在 70℃放置 10min,直到溶液变清亮。3、冷却后加入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。4、将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入 收集管中)12,000 rpm 离心 30-60sec,倒掉收集管中的废液。5、加入 500μl 抑制物去除液 IR, 12,000 rpm 离心 30sec,弃废液。6、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!), 12,000 rpm 离心 30sec, 弃掉废液。7、重复操作步骤 6。8、将吸附柱 AC 放回空收集管中, 12,000 rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温放置 数数分钟, 以 晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑 制下游反应。9、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 60-100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好),室温放 置 2min,12,000 rpm 离心 2min。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得 到的溶液再加入吸附柱 AC 中,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 2 min。(注意:若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存 在-20℃,以防 DNA 降解)

储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。RNaseA建议-20℃长期保存。

注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水 浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2、避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应 及时盖紧盖子。
3、不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异 也可能非常大。
4、开始实验前将需要的水浴先预热到 70℃备用。
5、为了 效果, 使用新鲜血液标本或者 4℃存放少于 3 天的标本,不要使 用反复冻融超过 3 次的标本,否则会严重降低产量。
6、洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用 水洗脱,但应该确保批 pH 大于 7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用 时可以适当稀释。

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