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产品描述:

产品名称:超纯土壤基因组DNA快速提取试剂盒

描述: 普通的手提或者试剂盒提取的土壤基因组DNA由于常常残留有PCR的强烈抑制物如腐殖酸、棕黄酸等杂质造成实验失败;另外,由于采用了剧烈的玻璃珠击打来破裂菌体,常常造成DNA剪切和降解。本公司经过长期研发开发出了具有自主知识产权的土壤基因组DNA,通过专利配方的腐殖酸和棕黄酸去除试剂配合特殊处理的纯化柱,可以 程度的去除这些杂质,同时加上多次柱漂洗,确保得到的DNA具有极高纯度,此外独特的抽提和裂解体系可以迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性。
产品特点:
1、本公司 的专利配方和纯化柱能有效去除腐殖酸等杂质。
2、不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
3、兼容性强,适用于各种不同的土壤包括淤泥等提取困难的土壤。
4、提取纯度高,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。
自备试剂:无水乙醇。
产品信息:

使用方法: 提示: 次使用前请先在漂洗液 WB 和溶液 S3 中加入一定量无水乙醇,充分 混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 1、取 0.2g 土壤放入离心管,用牙签或者枪头捣碎后加入 0.5ml 溶液 SUS,用枪头搅拌 后短暂涡旋帮助重悬。 如果预计土壤里面含有较多难裂解的菌类如革兰氏阳性菌,可先在 0.5ml 溶液 SUS 里面加入溶菌酶,吹打混匀后再加入,并加做步骤 2。 2、(可选步骤):37℃温育 30 min,每 10 min 颠倒混匀几次。 对于难裂解的菌类如革兰氏阳性菌含量丰富的土壤,并在上一步骤加入了溶菌酶的 样品,需要加做此步骤来帮助裂解。 3、加入 20μl 蛋白酶 K(20mg/ml)溶液,短暂涡旋帮助混匀。 可选做步骤: 为提高产量,可以在 37℃振荡 10min 或者涡旋振荡 2 min。(注意涡旋振 荡可能剪切 DNA) 4、加入 120μl 溶液 LYS,短暂涡旋混匀,65℃温育 30 min,期间颠倒混匀几次。 65℃温育时间可以根据具体样品种类和产量进行延长或者缩短以取得 产量和纯 度,可在 10 min-2 小时范围内调整。 5、(可选步骤):于-70℃冷冻,65℃融化,反复 3 次。 对于难裂解的菌类如革兰氏阳性菌含量丰富的土壤,可加做此步骤来帮助裂解。 6、颠倒混匀后,12,000rpm 离心 2 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。 7、加入 1/3 体积的溶液 S1,颠倒几次,涡旋 5 sec 混匀后,冰上放置 5 min。 8、12,000rpm 离心 5 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。 9、加入 1/3 体积的溶液 S2,颠倒几次,短暂涡旋混匀后,冰上放置 5 min。 该步骤主要是进一步去除 humic substance 等 PCR 抑制物质以提高纯度,但是会降 低一些产量,如果对产量要求高或者提取的 DNA 不用于 PCR,可以尝试略去此步骤 以提高产量。如果预计土壤成份复杂 PCR 抑制物质多,可以适当提高 S2 加入量(如加 入等体积的 S2),可以提高纯度,但是注意也会显著降低产量。 10、12,000rpm 离心 5 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。 11、加入 1.5 倍体积的溶液 S3(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒几次,短暂涡旋混 匀。 12、将上一步混合物 700μl(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入 收集管中),12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。重复直到所有的混合 物都加完。 13、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。 14、加入 500μl 漂洗液 WB(加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec,弃掉废液。 15、重复操作步骤 14。 16、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以 晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 17、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 50-100μl 洗脱 缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 3-5 min, 12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000rpm 离心 1 min。

储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。

注意事项: 1、溶液 LYS 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用,注意不要剧烈摇晃,以免 产生大量气泡。
2、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖 紧盖子。
3、溶液 S3 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染 皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4、洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保批pH大于7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

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