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产品描述:

产品名称:PCR 产物纯化试剂盒(磁珠法)

描述:

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,可以从各种 PCR 产物或酶促反应液中高通量快速地回收 100 bp-10 kb 的 DNA 的片段,回收效率达 80%以上。能有效地去除 PCR 产物或酶促反应液中的寡聚核甘酸、引物二聚体、盐、蛋白质等污染。整个过程操作简单,且不涉及有毒试剂,安全、便捷。回收的 DNA片段可以直接应用到各类下游分子生物学实验。
组分:

应用: 本试剂盒适合从各种 PCR 产物或酶促反应液中高通量快速地回收 DNA 的片段

使用方法:

自备材料:无水乙醇、离心管
操作步骤:
1、充分混合震荡磁珠溶液,使管内磁珠完全均匀悬浮起来。
2、向样品管(可使用 200 μL PCR 管或 96 孔板)中加入待纯化的 DNA 样品溶液。
3、取 1.8×样品体积的磁珠溶液加入样品管中,吹打或漩涡震荡 5 s 后,室温放置结合 5 min。
注意:放置期间如出现磁珠沉降现象应及时颠倒或者旋窝混匀,以保证磁珠处于悬浮状态。
4、将样品管置于磁力架上 2 min 左右或待磁珠被磁力架装置完全吸附,保持样品管在磁力架上静止,用移液枪吸取上清并弃掉,操作过程中避免触碰到磁珠团。
5、保持样品管在磁力架上,向管内慢慢加入 200 μL 85%乙醇溶液,保持样品管不离开磁力架以及磁珠团始终被吸附在管壁上,禁止分散开。
6、将样品管置于磁力架上 2 min 左右或待磁珠被磁力架完全吸附,保持样品管在磁力架上静止,用移液枪吸取上清并弃掉,操作过程中避免触碰到磁珠团。
注意:若离心管管口及管壁上粘有少量磁珠,请先用上清液冲洗至离心管内。
注意:吸弃废液时,尽量吸净管盖及管底残液,请勿吸入磁珠。
7、重复步骤 5-6,将管内的液体全部吸除干净。
注意:若离心管管口及管壁上粘有少量磁珠,请先用上清液冲洗至离心管内。
注意:吸弃废液时,尽量吸净管盖及管底残液,请勿吸入磁珠。
8、将样品管从磁力架上取出,于室温放置 3-5 min,使残留乙醇充分挥发。(观察磁珠无反光;颜色由棕黑色变为灰褐色;无液体挂壁)。
注意:室温晾干前,请先尽量吸净残液。乙醇残留会抑制后续的酶反应(如酶切、PCR 等)实验,应确保乙醇完全挥发后再进行下一步操作。同时避免过度干燥,磁珠过于干燥将会降低 DNA 洗脱效率。9、向管内加入 20-100 μL 洗脱液,并用移液枪轻轻吹打 5-10 次,使磁珠重悬混匀,操作过程中应注意避免产生气泡。
注意:如有特殊需要,可使用等量的灭菌去离子水作为洗脱液。建议调节去离子水的 pH 值在 7.0-8.5 之间,若pH 值不在此范围内,会影响洗脱效率及 DNA 质量。
10、室温放置 5 min 以充分洗脱。
注意:为了提高洗脱效率,放置期间如出现磁珠沉降现象应及时颠倒或者旋窝混匀,以保证磁珠处于悬浮状态。
11、将洗脱样品管放回磁力架上 2 min 或待所有磁珠都被磁力架装置完全吸附。
12、小心地将洗脱上清转移到新的灭菌管中,4℃或-20℃环境中保存备用。
注意:在转移过程不要碰到磁珠,如出现磁珠悬起现象请重复步骤 11-12

储存/保存方法:

磁珠可以在室温下(15-25℃)运输,但请置于2-8℃保存。
其余试剂室温保存,有效期12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。

注意事项:

1、请于本实验开始前穿上实验服、佩戴手套及口罩,避免实验操作过程中试剂沾染皮肤、眼睛等,并防止吸入口鼻。如不慎发生以上情况,请立即用清水冲洗,必要时请及时就医。
2、使用前请预先在漂洗液瓶或离心管中配制85%乙醇溶液。
3、磁珠在使用前一定要充分混匀。磁珠加入后,请尽量减少用枪头吹打混匀,防止磁珠沾在枪头上,造成基因组DNA损失。

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