公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!

产品描述:

产品名称:Oligo(dT)18磁珠(1um)

中文别名: 1 μm Oligo(dT)18 Magnetic Beads

描述:

 Oligo(dT)18磁珠,具有合适的 Oligo(dT)18 载量,尺寸约为 1 μm,分散性好,具有较高的磁含量,磁响应速度快。通过磁珠表面的 Oligo dT 与 mRNA 尾部 Ploy A 之间互补配对,Oligo(dT)18可以高效地从真核生物总RNA或直接从动植物组织、细胞中快速分离出完整、高纯度的mRNA。提取的 mRNA 可用于分子生物学的各种下游实验中,如 RT-PCR、cDNA 文库构建、Northern Blot 分析、引物延伸、基因表达分析等。
产品特征:
1、Oligo(dT)18的实验方案可在 30 分钟内完成,无需其他纯化步骤。
2、磁珠修饰的 Oligo(dT)18 可在捕获 mRNA 后作为反转录成 cDNA 第一链的引物。
3、 高的 poly A 特异性结合能力确保最大限度地提取 mRNA。
4、 1 mL 的 MagBeadsTM Oligo(dT)18 磁珠可以结合 10~20 μg 来自细胞或组织的 mRNA(取决于表达水平)。
5、来自细胞的 rRNA 是远远过量的,即使非特异性捕获效率低,仍会有一定的 rRNA 结合,在Oligo(dT)18上的 rRNA 通常会比 Oligo(dT)25 上的少。

浓度: 5 mg/mL

使用方法:

使用缓冲溶液和材料:(所有试剂需要使用 DEPC 处理的水配制)
1、建议缓冲液组:20×柠檬酸钠缓冲液(SSC):3M 氯化钠,0.3M 柠檬酸钠,pH 7.0;mRNA 杂交缓冲液:0.5×柠檬酸钠缓冲液(SSC);mRNA 洗涤缓冲液:0.2×柠檬酸钠缓冲液(SSC);
2、无 RNase 的 1.5 mL 离心管;
3、用于 1.5 mL 离心管的磁力架;
4、焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的灭菌水:纯水在 37℃下用 0.1% DEPC 处理至少 1 小时,然后加热至
100℃ 15 分钟或高压灭菌 15 分钟以除去任何痕量的 DEPC;
5、水浴锅。
清洗  Oligo(dT)18磁珠:
1、重悬试剂瓶中的 MagBeads™ Oligo(dT)18磁珠(即涡旋>30 秒,或手动摇晃至充分混匀)。
2、将所需体积(每 100 μg 总 RNA 对应 0.5 mg 磁珠)的 MagBeads™Oligo(dT)18 磁珠转移到离心管中,加入相同体积的杂交缓冲液,并重新悬浮。
注意:杂交缓冲液在低温保存条件下可能会沉淀。如果溶液产生沉淀,使用前应将溶液在室温放置一段时间,必要时可在 37℃水浴中预热 10 分钟溶解沉淀,摇匀后使用。
3、将离心管置于磁力架上 1 分钟,弃去上清液。
注意:吸弃废液时,尽量吸净管盖及管底残液,请勿吸入磁珠。
4、从磁力架上取下离心管,并将洗过的 MagBeads™Oligo(dT)18 磁珠重悬在与初始体积相同体积的杂交缓冲液中,留作下一步备用。
从 100 μg 总 RNA 中纯化 mRNA:
1、用 DEPC 处理过的灭菌水或 10 mM Tris-HCl(pH7.5)将总 RNA 样品的体积调整至 100 μL。
注意:如果总 RNA 浓度比 1 μg/μL 更稀,100 μg RNA 可以添加到更多体积。在这种情况下,步骤 3 中使用的杂交缓冲液的体积增加至等于总 RNA 样品的体积。
2、65℃加热总 RNA 溶液 10 分钟,然后将样品转移至冰上。
3、将 100 μL 总 RNA 溶液和 5 μL 20×SSC 缓冲液加入重悬的磁珠中,通过反复吸取混合。
4、在室温下孵育混合物,温和振荡 10 分钟以使 mRNA 与磁珠杂交。
5、使用磁力架收集与 mRNA 杂交的磁珠。
注意:若离心管管口及管壁上粘有少量磁珠,请将磁珠重悬至离心管,可参考如下步骤:将离心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附于管壁后,上下颠倒磁力架,使粘在管口的磁珠重悬至溶液中,避免磁珠损失。
6、用移液枪移除上清。
注意:如果需要,可以保留包含总 RNA 未结合部分的上清液,以便于之后完全提取 mRNA。
7、使用 100 μL 洗涤缓冲液洗涤结合 mRNA 的磁珠,轻柔混匀 1-2 分钟,使用磁力架进行磁分离弃上清。
8. 重复步骤 7 两次。
注意:完成最后一次清洗时务必清除所有洗涤缓冲液。
9、从磁力架上取下离心管,加入 20-50 μL DEPC 处理的灭菌水或 10 mM Tris-HCl(pH7.5),重悬磁珠。
10、65℃加热 2 分钟。
11、迅速使用磁力架收集上清,并将上清液转移至无 RNase 的离心管中。RNA 可以在-20℃保存一个月,在-80℃长期保存。 

储存/保存方法: 4℃密封保存,有效期12个月,禁止冷冻,使用前请充分混匀。

技术指标:

粒径:约1 μm
磁含量:约35 %-45%
保存溶液:0.02 M PBS,含 0.1%BSA 和 0.02%叠氮钠作为防腐剂
Oligo(dT)18载量:400 pmol / mg 磁珠

注意事项: 1、尽量减少 RNA 降解; 使用 RNA 时,请始终佩戴手套以尽量减少 RNase 污染;经常换手套;使用缓冲液时,只能使用不含 RNase 的一次性枪头;如有可能,从分离的总 RNA 中进行 mRNA 提取。
2、在小容量工作时,清洗过程中完全去除所有缓冲液非常重要;
3、始终将磁珠保持在液体悬浮液中,因为干燥的磁珠会导致分离效率降低;
4、建议将提取的 mRNA 立即用于 RT-PCR。如果需要储存,请加入 2.5 倍体积乙醇或等体积异丙醇并冷冻。 

产品信息订购:

产品更多信息请进入爱必信网站咨询