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产品描述:

产品名称:免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

描述:

本免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品,适用于 PAGE,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。

产品组分

英文别名: Western及IP细胞裂解液(带抑制剂)

外观: 溶液

使用方法:

1、试剂准备:

取适当量的裂解液,在使用前数分钟内将磷酸酶抑制剂按照1:50 加入裂解液中,加入100mM 的PMSF并使PMSF 的最终浓度为1mM。

2、细胞/组织的裂解:

对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗—遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250µL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分;

对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入150-250µL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。

对于组织样品:用组织剪将组织剪成碎片后,按照每 20mg 组织加入 150-250µL 裂解液的比例加入裂解液,并使用用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。

3、蛋白样品收集:

充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 lP 等操作。

注意事项: 1、为取得最佳的使用效果,可以适当分装后-20°C 保存使用,避免过多的反复冻融。
2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 2~8°C 进行。
3、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。

储存/保存方法: 细胞裂解液A保存于2~8℃,B、C保存于-20℃。有效期12个月。

产品信息订购:

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