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产品描述:

产品名称:SDS裂解液

描述:

SDS,也称十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate),是一种常见的阴离子去垢剂,常用于变性蛋白。SDS 裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液,主要成分为50mM Tris-HCl(pH 8.1),1% SDS 以及焦磷酸钠,甘油磷酸钠、正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于常规的蛋白免疫印迹(Western Blot),染色质免疫共沉淀(ChIP)等实验。 

技术指标:

A组分:SDS Lysis Buffer(100ml)
B组分:PMSF(100mM) (1.0ml)

使用方法: 1、培养的细胞样品:
(1)充分融解 SDS 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。
(2)贴壁细胞:吸除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-3 秒后,细胞就会被裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
(3)悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
(4)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等操作。 【裂解液用量说明】:通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200uμl 或 250ul。如果用于 ChIP,建议 6 孔板每孔细胞至少加入 200ul 裂解液。
2、组织样品:
(1)将组织剪切成细小的碎片。
(2)充分融解 SDS 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。
(3)按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】
(4)用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解,此过程尽量控制在 1-2 分钟内,以减少蛋白的降解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃继续裂解 10-20min。
(5)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等实验。
(6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。

储存/保存方法: -20℃,有效期12个月。

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