|
公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述:
产品名称:2×Fast qPCR Mix (Probe )
描述: 2×Fast qPCR Mix (Probe )结合了最新的缓冲体系技术和抗体修饰的热启动Taq酶,确保快速、高特异性和高灵敏度的实时荧光PCR检测,适用于所有实时荧光定量PCR仪。本试剂适用于探针(TaqMan®, Scorpions® and molecular beacon)检测。2×Fast qPCR Mix (Probe )包含所有实时荧光定量PCR的必要组分,包括dNTPs、稳定剂和增强剂,非常方便使用。操作时,实验人员只需添加引物,模板和探针。
使用方法: PCR 反应液配制(以 20μl 为例):| 2×Fast qPCR Mix (Probe ) | 10μl | | 10μM Forward Primer | 0.8μl | | 10μM Reverse Primer | 0.8μl | | 10μM Probe | 0.2μl | | 模板 | as required | | ddH2O | up to 20μl |
储存/保存方法: -20℃保存,有效期12个月。 技术指标: 灵敏度 and Ct 值:
当用我们公司的产品和其它同类产品比较时,我们强烈推荐梯度稀释扩增试验,直到不能检出的模板浓度,这是检测灵敏度的唯一方法。早期的 Ct 值不能代表好的灵敏度,只能说明扩增速度快。
PCR 扩增条件:
以下的程序适合长度200bp 以内产物的扩增,当然也可以根据不同情况适当调整。
| Step | Temp | Time | Cycles | | Polymerase activation | 95°C | *2-5min | 1 | | Denaturation | 95°C | 10s | 40 | | Annealing/ Extension | 60-65°C | **20-50s |
*2min for cDNA, 5min for genomic DNA
**两个探针以上的多重荧光检测需要达到50s
反应结束后,根据仪器情况可选择熔解曲线分析。
PCR优化提示:
引物和探针: 以下的建议是基于TaqMan探针的实时荧光PCR检测,其它类型探针请参考相关资料。任何实时荧光PCR检测的特异
性和扩增效率都与特定序列、引物探针浓度、和扩增子长度有关。我们强烈推荐考虑以下几点:
• 使用引物设计软件,比如Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3/) 或者visual OMPTM (http://dnasoftware.com/)。引物的Tm值一般
在60°C左右;
• 最佳的扩增子长度在80-200bp,最好不要超过300bp;
• 最终引物浓度400nM 适合大部分实时荧光PCR检测, 如需测试最佳引物浓度,我们建议梯度范围是0.2-1μM。同时引物浓度要
相同。
• 最终探针浓度100nM 适合大部分实时荧光PCR检测,我们建议探针的浓度跟引物浓度相比,至少低两倍。
注意:在多重实时荧光PCR检测中,探针浓度超过100nM 会导致荧光信号交叉污染。
模板:首先要确保模板的纯度和浓度,其次模板不能含有PCR抑制剂(如EDTA)。模板的用量取决于DNA的类型(genomic DNA和cDNA),以下几点需要考虑:
• Genomic DNA: 在单个PCR反应中,不要超过1μg
• cDNA: 在单个PCR反应中,我们建议使用100ng ,具体使用量根据情况调整
MgCl2: 2×Fast qPCR Mix (Probe ) 包含最优的浓度,无需再进一步优化
PCR 质控: 在实验过程中对可能存在的污染DNA的质控非常关键,它可能会影响你的实验数据真实性。在实验过程中一般需要包
含一个阴性质控(即不加模板)。当操作两步法RT-PCR 的时候,设置一个非RT的质控对照。
ROX: 2×Fast qPCR Mix (Probe ) 不包含ROX (5-carboxy-X-rhodamine, succinymidyl ester)。
适用仪器
2×Fast qPCR Mix (Probe )适用于所有的实时荧光定量PCR 仪。
产品信息订购:
| 产品货号
|
产品名称
|
规格 |
价格 |
大包装及货期 |
| abs60039 |
2×Fast qPCR Mix (Probe ) |
1ml×2 |
630.00 |
立即咨询
|
| abs60039 |
2×Fast qPCR Mix (Probe ) |
1ml×5 |
1523.00 |
立即咨询
|
产品更多信息请进入爱必信网站咨询
|
