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产品描述:
产品名称: PCR & DNA 片段纯化试剂盒
描述: 本产品利用硅基质材料在高盐缓冲体系对DNA高效、专一吸附的原理,配备自主研发的膜结合液(又称溶胶液)和高性能的硅胶膜离心吸附柱,用于纯化PCR反应产物或其他酶促反应体系中的DNA片段,可有效去除蛋白质、残留dNTP、引物、盐分等其他杂质,对引物二聚体的清除率在70%以上。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的吸附量为20 μg,对100 bp-10 kb线性DNA片段的回收效率可高达95%a,也可应用于20 kb以下环形质粒的脱盐纯化。整个操作可在10 min内完成,快速、简便。回收后的DNA可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。 a 实际回收率可能因DNA片段的大小、初始浓度不同而有差异。
产品特点
简单快速:膜结合液与胶块按 1:1 比例混合,避免因胶块过大反复上样离心; 高回收率:常规片段回收效率可达 90%,也可用于小片段回收,如 50 bp 回收率 20%-30%; 高纯度:直接用于自动荧光测序及其他分子生物学应用; 操作安全:无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀; 批次稳定:进口玻璃纤维吸附膜,遵循标准化生产流程,通过严格质检标准; 人性化设计:高品质耗材的人性化工业设计,方便使用; 添加平衡液:提升试剂盒使用寿命,柱平衡液可以把存储时间不同的盒子的吸附能力拉到统一的水平,减少高温高湿等环境对吸附柱的影响。
产品组分
| 组分名称 | abs60167_50 rxn | abs60167_200 rxn | 注意事项 | 膜结合液(MB) | 35 ml | 80 ml | | 膜漂洗液(MW) | 8 ml x 2 | 20 ml x 3 | 初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀 | 洗脱缓冲液(EB) | 5 ml | 20 ml | | 柱平衡液(BL) | 30 ml | 120 ml | 请使用当天平衡液处理过的吸附柱 | 高心吸附柱及收集管 | 50套 | 200套 | 常温密闭干燥保存 | 1.5 ml无前离心管 | 50个 | 200个 | 常温密闭干燥保存 | 产品说明书 | 1份 | 1份 | |
保存方法:常温保存,保质期24个月。
【实验准备】
1. 用户需自行准备的材料:无水乙醇,异丙醇,台式离心机。
2. 初次使用请按瓶标说明向每瓶膜漂洗液(MW)中加入相应体积的无水乙醇(用户自备),并在试剂瓶上做标记。
【操作步骤】
1. 柱平衡:向离心吸附柱中加入500 μl柱平衡液(BL),静止1 min,室温下12000 rpm离心1 min,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的吸附柱)
2. DNA结合:按每1 μl DNA样品加入1 μl膜结合液(MB)的比例(1:1)加入膜结合液,混匀后转移到插入收集管的离心吸附柱内,室温静置1 min,室温下12,000 rpm离心1 min,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新插回收集管中。
注:离心吸附柱的最大吸附量为 20 μg,每次最多可离心 950 μl 溶液,如溶液体积大于 950 μl,可分批转移到同一吸附柱内,分次离心;若样品体积低于 50 μl,可用灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液(EB)补足至 50 μl,再加入 50 μl 的膜结合液(MB)。为增加小片段的回收效率,当回收的DNA 片段小于 400 bp 时,可加入 1:1 体积的异丙醇。
3. 清洗:加入700 μl膜漂洗液(MW,请确认已加入无水乙醇)于离心吸附柱中,室温下12,000 rpm离心30s,弃除收集管中的废液,将离心吸附柱重新插回收集管中。
4. 再次清洗:加入500 μl膜漂洗液(MW)于离心吸附柱中,重复离心一次。弃除废液后,将离心吸附柱去盖再次离心1 min,彻底去除残余漂洗液。
5. 洗脱:小心取出离心吸附柱,将其套入一个新的1.5 ml灭菌离心管中。向硅胶吸附膜的中央加入30 μl洗脱缓冲液(EB),室温静置1 min后,12,000 rpm离心1 min收集纯化的DNA片段。
注:为提高回收片段浓度,离心收集后可将洗脱后的溶液再次加入离心吸附柱中重复洗脱一次,可提高约 20%的产量;如必须使用无菌去离子水洗脱,需注意其 pH 值是否接近中性,否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调节至 7.0-8.5 之间。
6. 储存:弃除离心吸附柱,获得的DNA片段可直接用于后续反应或于-20℃长期保存。
参考文献
1) ChunJie Guo, XuKai Ma, YuHang Xing, et al. Distinct Processing of lncRNAs Contributes to Nonconserved Functions in Stem Cells. Cell (2020), https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.03.006 IF: 36.216
2) ChuXiao Liu, Xiang Li, Fang Nan, et al. Structure and Degradation of Circular RNAs Regulate PKR Activation in Innate Immunity. Cell (2019), https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.03.046 IF: 30.4
3) ChuXiao Liu, XiangLi, FangNan, et al. Structure and Degradation of Circular RNAs Regulate PKR Activation in Innate Immunity. Cell. 2019; 177(4): 865-880. IF: 24.38
4) Yunpeng Xu, Zhidong He, Mengjiao Song, et al. A microRNA switch controls dietary restriction induced longevity through Wnt signaling. Embo Rep. 2019, 20:e46888 https://doi.org/10.15252/embr.201846888 IF: 5.28
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