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产品描述:
产品名称:快速内切酶SalI
描述: 爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有134%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
识别位点:
5'...G ↓ T C G A C...3'
3'...C A G C T ↑ G...5' 产品组分: | 名称 | 规格 | | SalI | 200 μl | | 10× Cut Buffer | 2×1 ml | | 10× Cut Color Buffer | 2×1 ml |
使用方法: 1. DNA 快速酶切流程:
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系: | | 质粒 DNA | PCR 产物 | 基因组 DNA | | ddH2O | 15 μl | 16 μl | 30 μl | | 10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer | 2 μl | 3 μl(a) | 5 μl | | 底物 DNA | 2 μl (up to 1 μg) | 10 μl (~0.2 μg) | 10 μl (5 μg) | | SalI | 1 μl | 1 μl | 5 μl | | Total | 20 μl | 30 μl | 50 μl |
a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× Cut Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切:
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系:
| DNA | 1 μg | 2 μg | 3μg | 4 μg | 5 μg | | SalI | 1 μl | 2μl | 3 μl | 4 μl | 5 μl | | 10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer | 2 μl | 2 μl | 3 μl | 4 μl | 5 μl | | Total | 20 μl | 20 μl | 30 μl | 40 μl | 50 μl |
注:如果总反应体系大于 20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量:
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 | | 2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 1 | 3 |
甲基化修饰影响:
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI | | 无影响 | 无影响 | 序列可能重叠剪切阻断 | 无影响 | 无影响 |
在不同反应缓冲液中的活性:
| | Cut Buffer | Thermo Scientific
FastDigest Buffer | NEB
CutSmart®
Buffer | Takara
QuickCut™ Buffer | | 活性 | 100% | 100% | 100% | 50% |
储存/保存方法: -20℃,有效期2年。 技术指标: 建议反应条件:
1× Cut 缓冲液;
37℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件:
80℃温育 20 min。
质量控制:
功能活性检测:
最适反应温度下,在 20 μl 反应体系中,1 μl SalI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA (HindIII digest)。
超长时间温育检测:
最适反应温度下,将 1 μl SalI 与 1 μg λDNA (HindIII digest) 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
最适反应温度下,使用 1 μl SalI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测:
最适反应温度下,将 1 μl SalI 与 1 μg 超螺旋质粒DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测:
将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl SalI 消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即 DNA 末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于爱必信的系列限制酶而言,白色菌落比例应小于 1%。
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| 产品货号
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产品名称
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规格 |
价格 |
大包装及货期 |
| abs60234 |
快速内切酶SalI |
200 rxns |
200.00 |
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