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产品描述:

产品名称:内切酶SgeI

描述: 爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
识别位点:
5'...m5 C N N G(N)₉ ↓ ...3'
3'... G N N C(N)₁₃↑...5'*
*SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列,一条链或双链甲基化均可被识别。
产品组分:

使用方法: 1. DNA 酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

储存/保存方法: -20℃,有效期2年。

技术指标: 建议反应条件:
1× Sgel 缓冲液;
37℃温育;
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
失活条件:
80℃温育 20 min。
酶活定义:
在 1×SgeI Buffer 条 件 下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中 37℃孵育 1 h,不断增加酶量,直至酶切产物 DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为 1 U。
质量控制:
核酸内切酶残留检测:
将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测:
将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 

注意事项: 1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。
2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的 DNA 产物会促进 SgeI 的非特异性酶切,因此建议酶切时优化 SgeI 酶量用于酶切反应。

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