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产品描述:

产品名称:改进型NP-40裂解液(带有抑制剂)

描述: NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液,其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

外观: 溶液

使用方法:

1、试剂准备:

融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内将蛋白酶抑制剂复合物按照1:50加入SDS裂解液中,或者使用100mM 的PMSF,并使PMSF的最终浓度为1mM。

2、细胞/组织的裂解:

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟;

对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

对于组织样品:用组织剪将组织剪成碎片后,按照每20mg组织加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液,并使用用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

3、蛋白样品收集:

充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

注意事项: 1、为取得最佳的使用效果,可以适当分装后-20°C保存使用,避免过多的反复冻融;
2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或2~8°C进行;
3、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。

储存/保存方法: 裂解液保存于2~8°C,其他保存于-20°C,一年有效。

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