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产地 | 中国 |
品牌 | 爱必信(absin) |
货号 | abs9239 |
用途 | - |
英文名称 | 见爱必信官网 |
包装规格 | 100ml |
纯度 | -% |
别名 | 免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) |
分子式 | - |
是否进口 | 否 |
描述 |
Western及IP细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时,用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。 |
外观 |
溶液
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使用方法 |
1、对于培养细胞样品
(1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。 (2)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。 (3)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 (4)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。 注:裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加100uL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。 2、对于组织样品 (1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。 (2)把组织剪切成细小的碎片。 (3)按照每 20mg 组织加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) (4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 (5)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 |
注意事项 |
1、若频繁使用本品,可以短期4℃保存。若不是频繁使用本品,建议刚使用本品的时候将裂解液分装冻存,避免反复冻融。
2、若需添加蛋白酶或磷酸酶抑制剂,可使用我司的广谱蛋白酶抑制剂混合物(abs9161),广谱磷酸酶抑制剂混合物(abs9162),以及PMSF,或者自行准备。 3、裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。 4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
基本信息 | |
储存/保存方法 |
-20℃冻存,有效期12个月。
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