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产品描述:
产品名称:去基因组与逆转录一管化三代预混液
描述: All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链 cDNA 合成试剂盒,包含 M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分,仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的 cDNA,下游可用于 qPCR、普通 PCR 等实验。
RNA 中存在基因组 DNA 污染,如果反转录前不做去除处理,下游进行 qPCR 反应时基因组 DNA 与 cDNA 会同时进行扩增,尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用 dsDNase 高效去除基因组 DNA 污染,区别于常规的 DNase I,dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA(dsDNA 以及 DNA 与 RNA 的杂合链),并且具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染的方法相比,dsDNase 无需额外加入 EDTA 进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase) 作为升级后的一链 cDNA 合成试剂盒,15 分钟内最长可获得 12 kb cDNA。
可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组 DNA 污染与反转录分开进行的操作方法,或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。
产品组成:
| 组分 | 规格 | | All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix | 400 µl | | dsDNase | 2×50 µl | | 10× dsDNase Buffer | 200 µl | | Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
浓度: 5 × 使用方法: 针对基因组含量高 RNA 样品
1、基因组 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系:
| 试剂 | 使用量 | | 模板 RNA a | 50 ng~1 μg | | dsDNase | 1 μl | | 10× dsDNase Buffer | 1 μl | | Nuclease-Free Water | To 10 μl |
a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 37℃温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染;
注:若 RNA 中基因组 DNA 污染严重,可适当延长 37℃温育时间至 5 min。
④ 65℃温育 2 min,使 dsDNase 失活,冰上放置。
2、第一链 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系:
| 试剂 | 使用量(实验组) | | “实验 1”反应产物 | 10 μl | | All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix | 4 μl | | Nuclease-Free Water | To 20 μl |
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 50℃温育 15 min;
注:若目标 RNA 不含 Poly(A) 结构,可预先 25℃温育 10 min。
④ 反应结束后,85℃温育 5 min,以终止反应;
⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。
注:cDNA 溶液置于 -20℃储存,建议不超过 1 周;置于 -80℃可长期储存。
针对基因组含量低 RNA 样品
① 于冰上配制如下反应体系:
| 试剂 | 使用量 | | 模板 RNA a | 50 ng~1 μg | | All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix | 4 μl | | dsDNase | 1 μl | | Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a. 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 37℃温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染;
④ 55℃温育 15 min;
⑤ 反应结束后,85℃温育 5 min 以终止反应;
⑥ 迅速将获得的 cDNA 置于冰上,用于后续实验;或立即保存于 -20℃。 注意事项: 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,也适用于不含 Poly(A) 结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。 储存/保存方法: -20 ℃保存,有效期24个月。
产品信息订购:
| 产品货号
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产品名称
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规格 |
价格 |
大包装及货期 |
| abs60245 |
去基因组与逆转录一管化三代预混液 |
100rxns |
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