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试剂描述:

胶原酶(Collagenase)是一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

胶原酶来源于溶组织梭菌(Clostridiumhistolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维;还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类,其在应用上具有一定区分。

产品名称:胶原酶 Ⅳ型

CAS号:9001-12-1

英文别名:Collagenase Ⅳ

来源:溶组织梭菌

纯度:活性≥160 CDU/mg

保存方法:2-8℃干燥保存,可置于-20℃长期保存,2年有效。

使用方法:

一、储存液制备：
1、直接往100mg胶原酶内加入100μl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。
2、根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/μl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。
3、立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。
4、使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。
二、组织分离：
1、用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；
2、加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；
3、37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4、将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
5、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6、低速离心，吸掉清洗液。用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
三、器官灌注：
1、将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2、按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；
3、将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
4、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
5、低速离心，吸掉清洗液。用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

应用:IV型胶原酶含较低的胰酶活性，通常用于制备胰岛细胞及髓系细胞。

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