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产地 | 上海 |
品牌 | 爱必信(absin) |
货号 | abs60539 |
用途 | - |
英文名称 | DNase I |
包装规格 | 1KU;5KU |
纯度 | 浓度5U/μL% |
别名 | 脱氧核糖核酸酶Ⅰ;DNase I |
分子式 | - |
是否进口 | 否 |
描述:
DNase I (脱氧核糖核酸酶 I)是一种可消化单链或双链 DNA 的脱氧核糖核酸内切酶,它识别并切割磷酸二酯键,产生 5’端为磷酸基团,3’端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。DNase I 的活性依赖于 Ca2+ , 并可被二价金属离子如 Mn2+ , Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解。而在Mg2+存在下,该酶可随机识别和切断 DNA任一链上的任意位点;而在 Mn 2+存在的条件下,可同时识别 DNA 的两条链并在几乎相同的位点进行切割,形成平末端或有 1-2 个核苷酸突出的粘末端 DNA 片段。
酶存储液:10mM Tris-HCl, 2mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7.6 25℃。
活力定义:1 活力单位(U)指在 37℃条件下,10 分钟完全降解 1μg pBR322 DNA 所需要的酶量。
质量控制:
RNase 活性:5 U 的本品和 1.6 μg MS2 RNA 在 37℃下反应 4 小时,RNA 的电泳谱带不发生变化;
细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版 第四部凝胶限度试验法通则(1143),细菌内毒素含量≤10 EU/mg。
来源:DNase I 在酵母表达体系中表达并分离纯化得到。
使用方法:
1、在RNase-free反应管中按照下表比例配置反应液:
2、37℃孵育 15min。
组分
加入量
RNA
X μg
10 × DNase I Buffer
1 μL
DNase I, RNase-free(5U/μL)
1 U per μg RNA
ddH2O
Up to 10 μL
3、 加入终止 Buffer 终止反应, 65℃加热 10 分钟使 DNase I 失活,样本 可直接进行下一步转录实验。
储存方法:-20 ℃以下保存。避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中,刚使用时建议进行分装。产品效期:12个月
注意事项:
1、每μg RNA 使用 1U DNase I, 如果 RNA 少于 1μg, 请使用 1U DNase I。
2、为避免酶失活过程中 RNA 被降解,应添加终浓度为 5mM 的 EDTA。