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产品描述:
产品名称:抗体染料法定量PCR预混液(通用ROX)
描述: Taq SYBR Green qPCR Premix 是 SYBR Green I 嵌合染料法专用 qPCR 试剂,为 2× 预混液,包含除引物和 DNA 样品以外的所有 qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶,配合精心优化的Buffer 体系以及 PCR 反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的 qPCR 结果。
预混液中含有独特校正染料,与一系列 qPCR 设备兼容,包括需要ROX 校正的仪器,实验操作过程中不需要额外添加染料来校正仪器。
产品组成: | 组分 | 规格 | | Taq SYBR Green qPCR Premix (Universal) | 5×1 ml |
使用方法: 1. 使用注意
① 因 Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡 ;
③ Mix 中含有 Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。
2. 建议的 qPCR 反应体系
| 试剂 | 使用量 | 终浓度 | | Taq SYBR Green qPCR Premix | 10 μl | 1× | | 正向引物 (10 μM) a | 0.4 μl | 0.2 μM | | 反向引物 (10 μM) a | 0.4 μl | 0.2 μM | | DNA 模板 b | X μl | 10~200 ng/20 μl | | Nuclease-Free Water | To 20 μl | |
a. 通常推荐的引物终浓度为 0.2 μM,反应效果不佳时可在 0.1~1 μM 范围内进行调整;
b. 推荐模板加样量为 1~2 μl,如模板类型为未稀释 cDNA 原液,模板添加量不应超过总反应体系的 10%。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的 DNA 模板添加量。
3. qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)
两步法
| 步骤 | 温度 | 时间 | | | 预变性 | 95℃ | 30 sec | | | 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 Cycles | | 退火 & 延伸 a | 60℃ | 30 sec | | 熔解曲线 b | 使用仪器默认采集程序 | |
三步法
| 步骤 | 温度 | 时间 | | | 预变性 | 95℃ | 30 sec | | | 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 Cycles | | 退火 a | 55~65℃ | 10 sec | | 延伸 a | 72℃ | 30 sec | | 熔解曲线 b | 使用仪器默认采集程序 | |
a. 根据引物的 Tm 值进行退火 & 延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在 200 bp 以内,退火 & 延伸(延伸)时间可以设置为 15 sec;此外,退火 & 延伸(延伸)时间的设置还需根据您使用的 qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整;
b. 不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
4. 实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行:
① 引物浓度调整
当引物终浓度在 0.1~1.0 μM 范围之间变化时,引物浓度越低,扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。
5. 引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在 80~200 bp;
② 引物长度为 18~25 bp;
③ 正向引物和反向引物的 Tm 值相差不超过 1℃为佳,Tm 值控制在58~62℃为佳;
④ 引物的 GC 含量控制在 40%~60% 之间;
⑤ 引物 A、G、C、T 整体分布尽量要均匀,避开 T/C 或者 A/G 的连续结构(特别是 3' 端);
⑥ 引物 3' 端最后一个碱基最好为 G 或者 C;
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;
⑧ 使用 NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。 储存/保存方法: 长期保存请于 -20℃避光保存,Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。
产品信息订购:
| 产品货号
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产品名称
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规格 |
价格 |
大包装及货期 |
| abs60247 |
抗体染料法定量PCR预混液(通用ROX) |
5×1ml |
780.00 |
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