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产品描述:
产品名称:双链DNA酶
描述: dsDNase 是一种核酸内切酶,能够裂解 DNA 中的磷酸二酯键,生成带有 5'- 磷酸和 3'- 羟基末端的寡核苷酸。dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA(double-stranded DNA, dsDNA)而不会消化单链
DNA、引物、探针和 RNA。dsDNase 具有热敏感性,可在 55℃条件下快速失活。dsDNase 主要用于反转录实验前快速去除 RNA 样本中的基因组 DNA 污染,与传统的使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染
的方法相比,无需额外加入 EDTA 失活,可减少对 RNA 的损伤,同时节省实验时间,保证 RNA 水平定量的准确性。
产品组成
| 组分 | 规格 | | dsDNase(1 rxn/μl) | 50 μl | | 10× dsDNase Buffer | 200 μl |
活性定义
根据 Kunitz 实验方法,在 25℃ pH 5.0 的条件下,以过量的大分子 DNA 为底物,在 260 nm 波长处每分钟能引起吸光度增加 0.001 的酶量定义为 1 个活性单位(U)。
储存缓冲液
25 mM Tris-HCl (pH7.5,@25℃ ), 2.0 mM MgCl2, 10 mM NaCl,0.01 % (v/v) Triton X-100, 50 % (v/v) glycerol。
抑制与失活
抑制条件:金属离子、EDTA、SDS、DTT、β- 巯基乙醇、高盐离子浓度等会抑制 dsDNase 的活性;
失活条件:55℃温育 5 min。
质量控制
蛋白质纯度
通过 SDS-PAGE 并考马斯亮蓝染色,该酶纯度 ≥90%。
RNA 酶活性检测
将酶液与 RNA 底物 在 37 温育 1 h,通过凝胶电泳检测没有发现RNA 底物降解。
功能检测
该产品被用于测试去除来自 RNA 样本中的基因组 DNA 并进行了RT-qPCR 扩增,发现去除率 ≥99.9%。RNA 数量不受 dsDNase 处理的影响。 使用方法: 使用方法
1、于冰上配制如下反应体系:
| 试剂 | 使用量 | | dsDNase | 1 μl | | 10× dsDNase Buffer | 1 μl | | 模板 RNA | X μl | | 总 RNA | 1 pg~5 μg/10 μl | | mRNA | 0.1 pg~500 ng/10 μl | | 特异性 RNA | 0.01 ng~500 ng/10 μl | | Nuclease-Free Water | To 10 μl |
2、轻轻吹打混匀反应体系后,将以上混合液在 37℃温育 2~5 min;
3、65℃热失活 2 min,迅速将获得的 RNA 置于冰上,用于后续实验。长期保存请置于 -80℃,避免反复冻融。 注意事项: 1、若 RNA 样本下游用于 RT-PCR,且目的基因长度 ≥3 kb,失活步骤前需添加终浓度为 10 mM 的 DTT;
2、为避免 RNA 降解,可在反应体系中加入适量的 RNase Inhibitor。 储存/保存方法: -20 ℃保存,有效期24个月。
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