10mg/ml

实验1：逆转录病毒感染（RetroviralInfection）
（1）重组逆转录病毒原液的制备：取5ml生长培养基加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45μm滤器过滤
（2）待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度约为5×105/盘。
（3）病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2ml病毒上清（或将病毒原液稀释到2ml）感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。
（4）收集病毒颗粒：加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
实验2：转染
（1）完全生长培养基培养细胞,培养细胞密度约50%；
（2）孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：
①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml）37°C预热；
②添加10ng~10μg质粒轻轻混匀；
③加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
（3）去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。
（4）去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shocksolution（15%DMSOin1×HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻轻摇晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
（5）立即去除DMSO shocksolution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。
（6）加入完全培养基到细胞中；
（7）稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。

-20°C，有效期2年。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

溶液