AgeI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA等的快速酶切。AgeI 快速内切酶在通用的CutOne或 CutOne Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5~15min内完成酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在CutOne Buffer中均具有较好活性，支持一管化反应，提升“酶切- 修饰 - 连接”的体验。CutOne Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA 片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

识别位点：
5'...A ↓ C C G G T...3'
3'...T G G C C ↑ A...5'
同裂酶：AsiGI, CspAI, BshTI, PinAI
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

建议反应条件
1× CutOne 缓冲液；
37℃温育；参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件
80℃温育 20 min。

产品组成：

质量控制：
功能活性检测：
37℃下，在 20ul 通用 CutOne反应体系中，1ul AgeI 能够在 15 min 内完全消化 1ug p615 DNA。
超长时间温育检测：
37℃下，在 20ul 通用 CutOne反应体系中，将 1ul AgeI 与 1ug p615 DNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测：
37℃下，使用 10 倍酶量的 AgeI 消化 DNA 底物， 回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 酶可以重新切开 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切 95% 以上的连接产物。
非特异性内切酶活性检测：
37℃下，在 20ul 通用 CutOne反应体系中将 1ul AgeI 与 1ug 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
蓝白斑检测：
使用 1ul AgeI 消化含有 lacZα 基因且仅在该基因上具有 1 个酶切位点的特定载体。将酶切产物重新连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，涂布在含有 X-gal、IPTG 和相应抗生素的 LB 平板培养基上生长。成功连接的 β- 半乳糖苷酶基因可以正确表达，并生长出蓝色菌落；而因酶切末端降解等原因未能重新连接的产物将得到白色菌落。对于AgeI限制酶而言，白色菌落的比例应当小于 1%。