爱必信(上海)生物科技有限公司
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产品展厅
AgeI
  • 品牌:爱必信(absin)
  • 产地:上海
  • 型号:25rxns
  • 货号:abs60338
  • 价格: ¥280/份
  • 发布日期: 2023-07-11
  • 更新日期: 2024-06-20
产品详请
产地 上海
品牌 爱必信(absin)
货号 abs60338
用途 适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA等的快速酶切
纯度 -%
规格 25rxns
是否进口
产品描述
描述

AgeI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA等的快速酶切。AgeI 快速内切酶在通用的CutOne或 CutOne Color Buffer中都具有优良的活性,能够在5~15min内完成酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在CutOne Buffer中均具有较好活性,支持一管化反应,提升“酶切- 修饰 - 连接”的体验。CutOne Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10 bp双链DNA 片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

识别位点:
5'...A ↓ C C G G T...3'
3'...T G G C C ↑ A...5'
同裂酶:AsiGI, CspAI, BshTI, PinAI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

建议反应条件
1× CutOne 缓冲液;
37℃温育;参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件
80℃温育 20 min。

产品组成:

组分 规格

AgeI

25ul

10× CutOne Buffer

1ml

10× CutOne Color Buffer

1ml
使用方法

1、DNA 快速酶切流程
(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

组分 质粒 DNA PCR 产物 基因组 DNA
ddH2O 15ul 16ul 30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer 2ul 3ula 5ul
底物 DNA 2ul (up to 1ug) 10ul (~0.2ug) 10ul (5ug)
AgeI 1ul 1ul 5ul
Total 20ul 30ul 50ul
a、本体系适用于经过纯化的PCR 产物酶切。未纯化的PCR 产物具备一定的离子强度,10× CutOne Buffer 加入量可适当减少至 2ul。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR 产物进行纯化。 
(2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴; 
(3)37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA); 
(4)80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选); 

(5)如果使用 CutOne Color Buffer 进行酶切反应,得到的产物可以直接进行上样电泳。


2、双酶切或多酶切 
(1) 每种快速内切酶的用量为 1ul,并根据需要适当扩大反应体系; 
(2)所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10; 
(3)如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。


3、适用于质粒的扩大反应体系

DNA 1ug 2ug 3ug 4ug 5ug
AgeI 1ul 2ul 3ul 4ul 5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer 2ul 2ul 3ul 4ul 5ul
Total 20ul 20ul 30ul 40ul 50ul
不同 DNA 中的酶切位点数量
λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2
13 0 0 0 0 0 0 5

甲基化修饰影响

Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI
无影响 无影响 无影响 无影响 无影响

储存/保存方法
-20°C 及以下运输及保存,长期保存建议放 80°C 。有效期2年。
技术指标

质量控制
功能活性检测:
37℃下,在 20ul 通用 CutOne反应体系中,1ul AgeI 能够在 15 min 内完全消化 1ug p615 DNA。
超长时间温育检测:
37℃下,在 20ul 通用 CutOne反应体系中,将 1ul AgeI 与 1ug p615 DNA 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测:
37℃下,使用 10 倍酶量的 AgeI 消化 DNA 底物, 回收酶切产物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 酶可以重新切开 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切 95% 以上的连接产物。
非特异性内切酶活性检测:
37℃下,在 20ul 通用 CutOne反应体系中将 1ul AgeI 与 1ug 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
蓝白斑检测:
使用 1ul AgeI 消化含有 lacZα 基因且仅在该基因上具有 1 个酶切位点的特定载体。将酶切产物重新连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中,涂布在含有 X-gal、IPTG 和相应抗生素的 LB 平板培养基上生长。成功连接的 β- 半乳糖苷酶基因可以正确表达,并生长出蓝色菌落;而因酶切末端降解等原因未能重新连接的产物将得到白色菌落。对于AgeI限制酶而言,白色菌落的比例应当小于 1%。

联系方式
手机:18438616290