此蛋白A检测ELISA试剂盒用来定量检测重组耐碱性等非天然的蛋白A，只能用于科研和生产，不能应用于人或动物疾病的诊断。本试剂盒提供一个样品的酸化处理方法，把蛋白A从IgG产品中分离出来，在人源化单抗浓度高达2mg/mL的情况下，蛋白A的检测限低至78pg/mL以下。

一、自备材料：
1、10-1000uL的移液器，单道和多道
2、100mL和1000mL的烧杯
3、去离子水
4、各种型号离心管
5、酶标仪（测450nm）

6、数据处理分析软件

三、样品处理过程：
1、样品如果需要稀释，采用试剂盒内的样品稀释液进行稀释，可以在96孔板或EP管中进行。
2、确保每个含有样品的孔（管）的体积都是100uL。
3、另外加入100uL的标准品和质控品到孔里。
4、每个孔再加入50uL酸化液，吹打混匀，室温孵育10min（使样品中proteinA和抗体酸化分离）。

四、试剂盒操作步骤：
1、标准品稀释： 8 个离心管标记 1#-8#，取 990uL 样品稀释液加入到 1#和 2#管中，取500uL 样品稀释液加入到3#-8#管中。再取 10uL 样品标准品加入到 1#管中，涡旋混匀后取 10uL 再加入到2#管中涡旋混匀。然后取 2#管 500uL 液体加入到 3#管中涡旋混匀，再取 3#管 500uL 液体至4#管中涡旋混匀，如此直至 8#管。


稀释完全之后 ，2#-8#离心管中 protein A 标准品的浓度分别为 5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078ng/mL。另外标记一管为 0ng/mL，加入样品稀释液。标准品和样品准备好之后就进入样品处理程序。
2、在包被有 protein A 抗体的酶标板中加入 100uL/孔的生物素标记的结合抗体。
3、再加入 25uL 酸化处理好的标准品、样品、质控品和空白到合适的孔里，室温孵育 1h。
4、甩干，洗涤 4 次之后，加入 100uL/孔的亲和素标记 HRP，室温孵育 10min。
5、甩干，洗涤 4 次之后，加入 100uL/孔的 TMB 显色液，显色 10min，加入 100uL/孔终止液，然后在 450nm 处检测吸光值。

五、数据处理和结果分析：
利用软件（如 Curve Expert 或 ELISA Calc）通过标准品浓度梯度来建立检测标准曲线，把 OD值和标准品浓度的对应关系用 4 参数逻辑拟合或三次多项式线性拟合成标准曲线，然后把检测样品的 OD 值带入相应曲线方程计算出对应的样品浓度。

六、分析方法指标：
1、精密度：在样品浓度大于 0.3ng/mL 的时候，检测变异系数小于 10%；样品浓度小于0.3ng/mL 的时候，检测变异系数略大于 10%。
2、建议检测具体样品的时候，采用添加质控品的方法来考察样品基质效应对检测结果的影响。
3、本试剂盒的灵敏度为 0.05ng/mL。
4、勾状效应：本试剂盒是双抗夹心一步法，产生勾状效应的浓度为 10ug/mL。