产品描述：

SfiI 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有活性，支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。CutOne Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10 bp双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

识别位点：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'

建议反应条件：
1× CutOne™ 缓冲液；
50℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件：
不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。

产品组成：

组分	规格
SfiI	100 μl
10× CutOne Buffer	1 ml
10× CutOne Color Buffer	1 ml

使用方法：

1、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

组分	质粒 DNA	PCR 产物	基因组 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	3ula	5ul
底物 DNA	2ul (up to 1ug)	10ul (~0.2ug)	10ul (5ug)
SfiI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× Cutone Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
（3）50℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
（4）酚氯仿抽提或柱纯化（可选）；

（5） 如果使用 CutOne Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2、双酶切或多酶切
（1）每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
（2） 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；
（3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3、适用于质粒的扩大反应体系

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
SfiI	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
0	0	0	0	0	1	0	3

甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	剪切受影响	剪切受影响	无影响	无影响

技术指标：

质量控制：
功能活性检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，1 μl SfiI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg pEPE DNA。

超长时间温育检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，将 1 μl SfiI 与 1 μg pEPE DNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。

酶切 - 连接 - 再酶切检测：
50℃下，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。

非特异性内切酶活性检测：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中将 1 μl SfiI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。