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产地 | 上海 |
品牌 | Absin |
货号 | abs60372 |
用途 | 适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切 |
包装规格 | 200rxns |
纯度 | -% |
是否进口 | 否 |
PspGI (EcoRII) 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有优良的活性,能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有活性,支持一管化反应,提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。CutOne Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与 10 bp双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
识别位点:
5'... ↑ C C W G G ...3'
3'... G G W C C ↑ ...5'
建议反应条件:
1× CutOne缓冲液;
75℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件:
不可热失活,请使用酚氯仿抽提或柱纯化。
甲基化敏感性:
对于被 Dcm 甲基化的 DNA,剪切可能受阻。
产品组成:
组分 | 规格 |
PspGI | 200 μl |
10× CutOne Buffer | 2×1 ml |
10× CutOne Color Buffer | 2×1 ml |
组分 | 质粒 DNA | PCR 产物 | 基因组 DNA |
ddH2O | 42ul | 34ul | 30ul |
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer | 5ul | 5ula | 5ul |
底物 DNA | 2ul (up to 1ug) | 10ul (~0.2ug) | 10ul (5ug) |
SfiI | 1ul | 1ul | 5ul |
Total | 50ul | 50ul | 50ul |
2、双酶切或多酶切
(1)每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
(2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
(3)如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3、适用于质粒的扩大反应体系
DNA | 1ug | 2ug | 3ug | 4ug | 5ug |
PspGI | 1ul | 2ul | 3ul | 4ul | 5ul |
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul |
Total | 50ul | 50ul | 50ul | 50ul | 50ul |
不同 DNA 中的酶切位点数量
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
71 | 2 | 6 | 5 | 5 | 17 | 7 | 136 |
甲基化修饰影响
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
无影响 | 剪切受阻 | 无影响 | 无影响 | 无影响 |
-20°C 及以下运输及保存,长期保存建议放 80°C 。有效期2年。
功能活性检测:
75℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中,1 μl PspGI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA (Dcm-)。
超长时间温育检测:
75℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中,将 1 μl PspGI 与 1 μg λDNA (Dcm-) 共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
75℃下,使用 10 倍酶量的 PspGI 消化 DNA 底物,回收酶切产物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。
非特异性内切酶活性检测:
37℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中将 1 μl PspGI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。