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罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)
  • 品牌:Absin
  • 产地:上海
  • 货号:abs47048270
  • 价格: ¥1500/份
  • 发布日期: 2023-11-07
  • 更新日期: 2024-06-14
产品详请
产地 上海
品牌 Absin
货号 abs47048270
用途 (1)对固定的组织切片和组织细胞培养物进行肌动蛋白丝的荧光染色;(2)体外制备稳定的荧光肌动蛋白丝(F-actin)
纯度 -%
规格 300T
是否进口

描述:

鬼笔环肽(Phalloidin),又称鬼笔鹅膏素,最初是从毒蘑菇鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中分离到的一种七肽毒素,以极高的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin(聚合形式的肌动蛋白),不会结合单体肌动蛋白(G-actin)。不像肌动蛋白抗体,同时识别单体和聚合形式的肌动蛋白。鬼笔环肽对大小纤维的亲和力相近,在许多不同的动植物物种的肌肉和非肌肉细胞中,基本都按照一个肌动蛋白亚基与一个鬼笔环肽分子的化学计量比结合。不像肌动蛋白抗体,对不同物种或来源的肌动蛋白亲和力会发生明显变化。鬼笔环肽的非特异性结合几乎可忽略,染色和未染色区域的差异极其明显。鬼笔环肽使得肌动蛋白聚合/解离的临界浓度降至1μg/ml,可用作一种聚合增强剂。另外,产生的复合物高度稳定(解离常数约3×10–8M),能够抑制细胞松弛素、碘化钾和温度上升引起的去聚合和去组装活性。
        鬼笔环肽及其衍生物在纳摩尔浓度即可对F-actin染色,且水溶性良好,是非常实用和方便的探针,对组织切片、细胞培养物或无细胞体系内的F-actin进行定性和定量研究。另外,鬼笔环肽及其衍生物很小,直径约12–15 ?,分子量2000 Da,经标记后的F-actin仍维持许多标记前的功能。比如,标记的甘油抽提肌纤维仍能收缩;标记的肌动蛋白丝仍能在固相肌球蛋白基质中移动。
        本品为TRITC荧光标记的鬼笔环肽(TRITC-Phalloidin),冻干粉形式提供,可直接溶于甲醇或DMSO配置成适当浓度的储存液。之后用PBS或PBS+1% BSA稀释到合适的工作浓度。常用工作浓度范围80-200nM。

使用方法:

1、储液制备:
        罗丹明荧光染料标记的鬼笔环肽:取适量甲醇或无菌水溶解棕色管中冻干的粉末,制备成 200T/mL 的储液(300T 规格染料加入 1.5 mL 的液体,50T 规格染料加入 0.25 mL 的液体即可)。
        罗丹明标记鬼笔环肽的一个单位(T)的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。对于罗丹明标记的鬼笔环肽,使用时的推荐稀释比例为 1: 40-1: 200,一个单位相当于 200 μL 总染色体积中加入 1-5 μL 200T/mL 储备溶液。
注:稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。


2、固定细胞染色:
以下方案是针对生长在玻璃盖玻片或 8 孔室玻片上的贴壁细胞的染色步骤。鬼笔环肽也可用于染色固定的冷冻或石蜡组织切片。
(1)用 PBS 清洗细胞 3 次。
(2)用含有 4%甲醛的 PBS 溶液固定细胞,室温固定 20 min。
注:甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此尽量避免含有任何甲醇的固定剂。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
(3)用 PBS 清洗细胞 3 次。
(4)用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 溶液在室温下透化细胞 10 min。
(5)用 PBS 清洗细胞 3 次。
(6)用 200 μL PBS 稀释 1-5 μL 荧光标记的鬼笔环肽储液,加入一个盖玻片或孔中,室温孵育 20 min,进行染色。
注:染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发,可将盖玻片放于密封容器内。
(7)用 PBS 清洗细胞 2-3 次。
(8)荧光显微镜观察。标记的鬼笔环肽具有很好的光稳定,样品可以在 PBS 中成像,但为了效果较好,也可以使用抗荧光淬灭剂观察。


3、活细胞染色:
        荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性,因此没有被广泛用于活细胞标记。然而,有报道称活细胞可能通过胞饮或未知机制进行标记。一般来说,染色活细胞时需要更多的染料。或者,荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌动蛋白分布和细胞运动。

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