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产品展厅
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产品详请
| 产地 | 上海 |
| 品牌 | Absin |
| 货号 | abs60265 |
| 用途 | 见产品详情 |
| 纯度 | -% |
| 规格 | 20T，40T |
| 是否进口 | 否 |
产品介绍：
该产品采用基因工程改造的Poly A聚合酶，可为miRNA高效添加Poly A尾，以便于后续的RT反应。逆转录引物为特别设计的含有Oligo d(T)的引物，高度亲和含有Poly A尾的miRNA，使RT反应能够高效进行。它的RT效率优于多家同类产品，尤其是与我们的 miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂配套使用，可免费获得配套的qPCR下游引物和更加理想的实验结果。
产品特点：
1.基因工程优化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速；2.特别设计的含Oligo d(T)的引物，能够与miRNA Poly A+高效结合，RT效率高于多家同类试剂；
3.同一RNA一次RT可获得多个miRNA的RT产物，后续可进行多个miRNA的检测，节省样本用量；
4.可配套 miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂使用，获得优化的实验结果并可免费获得配套的下游引物。
操作步骤：
1.RNA加A尾： 取RNase-free离心管，配制如下混合液：RNase free ddH2O to 20μl、 Poly A 1μl、2xPoly A Buffer 10μl、RNA 10pg~2ug轻轻混匀，37℃ 30min，迅速置于冰上。2. RT反应液配制： 上述反应液在使用前5000rpm离心5s：取上述反应液 8μl、2x RT Buffer 10μl 、RTase Mix 2μl用移液器轻轻吹打混匀。
3. RT反应：
| 25℃ | 5min |
| 50℃ | 15min |
| 85℃ | 5min |
反应完毕后，5000rpm离心5s，尽快放于冰上，直接进行PCR反应。如暂时不用，请放置于-20°C以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃。
保存方法：
-20°C 储存，避免反复冻融；有效期1年
注意：
1、用于RT反应的器具和水应进行RNase灭活处理，操作人员应佩戴口罩、手套等，以防RNase污染。2、模板RNA使用量：总RNA可在10pg~2ug之间。
3、试剂配制过程建议在碎冰上进行，RTase Mix粘度较大，应缓慢吸取，Tip头不要插入液体太深，以免粘染太多酶液。
以合成的U6为样本，使用本试剂盒，加A、反转录，取1/10cDNA产物进行qPCR，CT值小于20
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