miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒-爱必信（上海）生物科技有限公司

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miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒

品牌：Absin

产地：上海

货号：abs60271

价格： ￥1376/份
发布日期： 2023-11-09
更新日期： 2024-04-26

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产品详请

产地	上海
品牌	Absin
货号	abs60271
用途	见产品详情
产品规格	200T，300T；400T
纯度	-%
是否进口	否

产品介绍：

该产品采用本司生产的化学修饰的热启动聚合酶，使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA的荧光扩增，具有高度的特异性，能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，荧光信号强，反应灵敏度优于多家同类产品。试剂盒免费配置优化后的Tag Primer，使miRNA的扩增效果更有保障。

产品特点：

1.使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，可有效避免非特异扩增；
2.反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，拥有更高的反应灵敏度；
3.免费提供优化的Tag Primer，miRNA的扩增效果更有保障。

试剂盒组成：

组份	200T	300T	400T
2× miRNA SYBR Mastermix	1.0ml × 2	1.0ml × 3	1.0ml × 4
Tag Primer	80uL	120uL	160uL
ddH2O	1.0ml × 2	1.0ml × 3	1.0ml × 4

使用方法：

一、按下表配制反应体系：取RNase-free离心管，配制如下混合液：

2× miRNA SYBR Mastermix	10uL
Specific Primer（10uM）a	0.4uL
Tag Primer（10uM）b	0.4uL
Temlate DNA/cDNA	2.0uL
ddH2O	to 20uL

注：a. Specific Primer 指 miRNA 的上游特异性引物，即由本公司设计的正向引物，一般标注为：xx-miR-X-X-F，该引物可自行设计合成，本公司也可免费提供设计；若使用 U6 作为参照时，Specific Primer 标注为 U6-Forward Primer。
b. Tag Primer 为本公司专用 miRNA 反向引物，若使用 U6 作为参照时，Tag Primer 标注为 U6-Reverse Primer。

二、设置反应条件：

激活Taq	95℃ 5min
PCR循环	95℃ 10S；60℃ 30S；40循环
熔解曲线	95℃ 15S；60℃ 1min；95℃ 15S；1循环

* 仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可。

保存方法：

-20°C 避光储存，避免反复冻融；有效期1年。

注意事项：

1、一般来说反应体系中引物终浓度为0.2uM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时，可以在0.1-1.0uM范围内调整引物浓度。
2、加样体积一般不超过2.0uL，刚开始实验建议进行优化摸索，可分别取2.0uL RT原液及2、4、8、16、32、64倍稀释液进行qPCR。
3、如PCR结果不甚理想，可考虑采用3段法温度设置进行扩增，扩增条件为：95℃ 5min；95℃ 10S；60℃ 20S；70℃ 20S（收集荧光信号）。
4、试剂保存与操作过程中避免强光照射。
5、配制反应体系时，避免过于震荡，以防气泡产生。
6、购买该系列配套产品，公司免费提供引物设计，具体详情请与公司客服联系。
7、以合成的U6为样本，加A、反转录，使用本试剂盒，按本说明书进行qPCR，CT值小于20。
8、如每次使用量较少，推荐小份分装使用。