描述：

鬼笔环肽（Phalloidin），又称鬼笔鹅膏素，最初是从毒蘑菇鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离到的一种七肽毒素，以极高的亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin（聚合形式的肌动蛋白），不会结合单体肌动蛋白（G-actin）。不像肌动蛋白抗体，同时识别单体和聚合形式的肌动蛋白。鬼笔环肽对大小纤维的亲和力相近，在许多不同的动植物物种的肌肉和非肌肉细胞中，基本都按照一个肌动蛋白亚基与一个鬼笔环肽分子的化学计量比结合。不像肌动蛋白抗体，对不同物种或来源的肌动蛋白亲和力会发生明显变化。鬼笔环肽的非特异性结合几乎可忽略，染色和未染色区域的差异极其明显。鬼笔环肽使得肌动蛋白聚合/解离的临界浓度降至1μg/ml，可用作一种聚合增强剂。另外，产生的复合物高度稳定（解离常数约3×10–8M）。

鬼笔环肽及其衍生物在纳摩尔浓度即可对F-actin染色，且水溶性良好，是非常实用和方便的探针，对组织切片、细胞培养物或无细胞体系内的F-actin进行定性和定量研究。另外，鬼笔环肽及其衍生物很小，直径约12–15?，分子量2000Da，经标记后的F-actin仍维持许多标记前的功能。比如，标记的甘油抽提肌纤维仍能收缩；标记的肌动蛋白丝仍能在固相肌球蛋白基质中移动。

本品为Fluor 555荧光标记的鬼笔环肽（Fluor 555-Phalloidin），以冻干粉液形式提供。可发出高亮度、光稳定的橙红色荧光，染色反应特异性强。

使用方法：

1、储液制备：

Fluor 555荧光染料标记的鬼笔环肽：取适量甲醇或无菌水溶解棕色管中冻干的粉末，制备成200T/mL的储液（300T规格染料加入1.5mL的液体，50T规格染料加入0.25mL的液体即可）。

Fluor 555标记的鬼笔环肽的一个单位（T）的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。对于 Fluor 555鬼笔环肽，使用时的推荐稀释比例为 1: 40-1: 200，一个单位相当于200μL总染色体积中加入1-5μL 200T/mL储备溶液。
注：稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。

2、固定细胞染色：

以下方案是针对生长在玻璃盖玻片或8孔室玻片上的贴壁细胞的染色步骤。鬼笔环肽也可用于染色固定的冷冻或石蜡组织切片。
1）用PBS清洗细胞3次。
2）用含有 4%甲醛的 PBS 溶液固定细胞，室温固定 20 min。
注：甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此好避免含有任何甲醇的固定剂。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
3）用 PBS 清洗细胞 3 次。
4）用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 溶液在室温下透化细胞 10 min。
5）用 PBS 清洗细胞 3 次。
6）用 200 μL PBS 稀释 1-5 μL 荧光标记的鬼笔环肽储液，加入一个盖玻片或孔中，室温孵育 20 min，进行染色。
注：染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发，可将盖玻片放于密封容器内。
7）用 PBS 清洗细胞 2-3 次。
8）荧光显微镜观察。标记的鬼笔环肽具有很好的光稳定，样品可以在 PBS 中成像，但为了效果佳，也可以使用抗荧光淬灭剂观察。

3、活细胞染色：

荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记。然而，有报道称活细胞可能通过胞饮或未知机制进行标记。一般来说，染色活细胞时需要更多的染料。或者，荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌动蛋白分布和细胞运动。

储存/保存方法：

-20℃避光干燥保存，有效期2年。

注意事项：

1）鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg）；
2）使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验；
3）本产品为冻干粉形式，微量不易观察，使用前请瞬时离心，加适当溶剂溶解后使用，溶解后的溶液近乎透明色；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品引用文献：