虽然液相蛋白定量检测的技术很多,但是大多数的技术仅能对样本进行单一指标的检测,同时检测多个指标时则需要提供大量的样本分批检测,操作繁琐,且各指标间差异性较大。对于样本量较少或需要对比各指标的用户,传统的技术无法满足需要。再者日常实验中,常需对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测,如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析,由于这些因子的含量较少,低于一般常规方法的检测下限,使用常规的蛋白检测方法Western Blot等很难检测。爱必信提供CBA法多因子检测试剂盒,提供了更加灵活、简便、高效的微量样本多重检测方案。
原理:
将特定的抗体偶联到特定的具有不同荧光强度的微球表面,制备成为待测因子的捕获微球(Capture Antibody)。将捕获微球与待测样本(血清、血浆或者细胞培养液)进行孵育,此时待测的细胞因子被特定的微球捕获。生物素标记的检测抗体,形成抗体包被微球-细胞因子-检测抗体的免疫复合物,加入藻红蛋白标记的链霉亲和素与生物素结合,通过流式细胞仪检测,获得待测物的荧光强度,荧光强度与样本中因子的含量成正比,最后结合这十二种细胞因子标准品的标准曲线,从而实现对同一份样本中多个因子的定量检测,辅助判断机体的免疫功能状态。
不同指标检测灵敏度:
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|
注:若检测结果超出检测范围,应用标准品/样品/微球稀释液将样本稀释适当的倍数重新检测;若待测样本的检测结果低于检测下限或未检测到,建议直接报告为≤最低检测值。
模版建立方法:
1、微球群分布:
特异性 |
微球位置 |
微球所属区域 |
human TNF-α |
L1 |
R1 |
human IFN-γ |
L2 |
R1 |
human IL-2 |
L3 |
R1 |
human IL-4 |
L4 |
R1 |
human IL-6 |
L5 |
R1 |
human IL-10 |
L6 |
R2 |
human IL-12P70 |
L7 |
R2 |
human IL-1β |
L8 |
R2 |
human IL-8 |
L9 |
R2 |
human IL-17 |
L10 |
R2 |
human IFN-α |
L11 |
R3 |
human IL-5 |
L12 |
R3 |
注:微球内部用不同强度的荧光染料染色。
2、模板建立:模板建立可参考:
(1)建立X轴为FSC-H,Y轴为FSC-A的密度图模板,设定门,不包含碎片和黏连的微球,如下图1,P6;
(2)建立X轴为FSC-H、Y轴为SSC-H的线性密度图模板,设定混合微球位置R1,R2,R3,如下图2;
(3)建议两个PE(X轴)和APC(Y轴)的对数密度图模板,分别显示R1门,R2门,R3门内微球,使得微球群能够清楚和明显的分布于散点图上,显示各因子PE荧光强度。如图3,图4,图5。
3、样品的检测结果分析
各标准品及样本依次上机检测,对于每种微球群,应最少获取100个微球。利用标准品梯度作标曲,计算样本检测结果。
CBA应用领域:
CBA与传统的蛋白定量相比有以下优势:
1、微量检测: 一个样本同时检测多个因子,只需25ul。
2、数据更可靠: 多指标来源于同一样本
3、检测速度快:多因子同时检测,无需过夜孵育。
4、灵敏度高:低至1.22pg/mL。
Absin CBA盒子优点:
1、性能好:采用Biotin-SAV信号放大系统,灵敏度更高。
2、磁性微球: 搭配磁标板,操作简单。
3、适用广:与多种流式细胞仪兼容。
4、易分析:免费提供FCAP v3.0分析软件。
5、指标灵活:检测指标可灵活组合。
可自由组合的多因子检测Kit:
Absin现有Kit
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs50187 |
小鼠十一项细胞因子检测试剂盒(流式荧光发光法) |
48T/96T |
abs50186 |
人十二项细胞因子检测试剂盒(流式荧光发光法) |
48T/96T |
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs7985 |
96孔磁标板 |
1个 |
在试剂盒现有指标的基础上,可以选择个别指标进行组合,形成更少指标的盒子(比如四项或者五项细胞因子)但是human和mouse指标不通用。可联系业务人员咨询组合Kit价格和货期。
Human指标 |
Mouse指标 |
human TNF-α |
mouse TNF-α |
human IFN-γ |
mouse IFN-r |
human IL-4 |
mouse IL-4 |
human IL-6 |
mouse IL-6 |
human IL-5 |
mouse IL-5 |
human IL-10 |
mouse IL-10 |
human IL-12P70 |
mouse IL-12P70 |
human IL-1β |
mouse IL-1β |
human IL-17 |
mouse IL-17A |
human IL-2 |
mouse MCP-1 |
human IL-8 |
mouse GM-CSF |
human IFN-α |
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