解密病毒侵入新机制：CTB-AF488助力PRRSV-2“搭车”宿主细胞的内吞研究

在病毒学研究中，揭示病毒如何“劫持”宿主细胞的内吞机制进入细胞，是开发抗病毒药物的关键突破口。近期，一篇发表于美国微生物学会 mBio（IF:4.7）的研究论文“ATP1A1 enhances porcine reproductive and respiratory syndrome virus type 2 attachment and internalization”为我们带来了新见解。

该研究发现，宿主蛋白ATP1A1通过调控胞膜窖/脂筏介导的内吞途径，帮助猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV-2）成功入侵细胞。在这一复杂的信号通路验证过程中，爱必信（Absin）的 Alexa Fluor 488 标记霍乱毒素B亚基（CTB-AF488，货号：abs80006） 作为关键的示踪工具，发挥了不可替代的作用。

为什么选择CTB-AF488？—— 胞膜窖/脂筏途径的“金标准”

胞膜窖（Caveolae）和脂筏是细胞膜上的特定微结构域，许多病毒（包括PRRSV）会利用这一途径“欺骗”细胞，实现内化。霍乱毒素B亚基（CTB）因其能与脂筏标志物GM1神经节苷脂特异性结合，并通过胞膜窖途径内化，而被公认为该内吞途径的特异性示踪剂。爱必信的CTB-AF488（绿色荧光）凭借其高亲和力、高亮度及优异的光稳定性，帮助研究人员直观、定量地证实了ATP1A1对这一途径的调控作用。

爱必信CTB-AF488的应用亮点：从机制验证到共定位分析

以下是该文献中利用爱必信CTB-AF488进行实验的具体方法论及应用成果：

1. 验证ATP1A1对胞膜窖/脂筏内吞的调控作用（定量分析）

研究假设：ATP1A1缺失是否会影响胞膜窖途径的内吞能力？

实验方法：使用siRNA敲低细胞中的ATP1A1表达，加入爱必信CTB-AF488（10 μg/mL） 与细胞共孵育1小时，通过流式细胞术（FITC通道）检测细胞对CTB-AF488的摄取效率。

关键结果：ATP1A1敲低后，细胞摄取CTB-AF488的能力显著下降（见原文Fig. 3F, 3I）。这有力证明了PRRSV-2进入细胞依赖于ATP1A1调控的胞膜窖/脂筏途径。

2. 观察病毒蛋白与内吞途径的共定位（亚细胞定位）

研究假设：PRRSV病毒颗粒是否通过胞膜窖结构进入细胞？

实验方法：感染PRRSV-2病毒，加入爱必信CTB-AF488（10 μg/mL，绿色） 标记胞膜窖，使用特定抗体对病毒N蛋白（紫色）和ATP1A1蛋白（红色）进行免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察。

关键结果：清晰的共定位图像显示，ATP1A1与病毒颗粒共同聚集在CTB-AF488标记的绿色囊泡结构中（见原文Fig. 3K）。这直观地证明了ATP1A1与病毒在胞膜窖内共内化。

详细实验方法速览：

1. 细胞准备：Marc-145细胞（或原代PAMs）培养至70%-80%融合度。

2. 标记孵育：去除培养基，加入含有CTB-AF488（10 μg/mL） 的新鲜培养基。注意：如需观察内吞与病毒感染的关系，可在此时同时加入病毒（MOI=50）。

3. 内吞处理：将细胞置于37°C培养箱中孵育 1小时。对照组可置于4°C以抑制内吞活性。

4. 洗涤：使用预冷的PBS洗涤细胞3次，去除未结合的毒素及病毒。

5. 固定与透化：

（1）特殊提示：如果检测ATP1A1蛋白，需使用预冷甲醇固定；常规检测可用4%多聚甲醛（PFA）固定。

（2）使用0.2% Triton X-100进行透化处理。

6. 免疫荧光染色：封闭后，孵育对应的一抗（如抗-ATP1A1，抗-PRRSV N），随后孵育对应的Alexa Fluor偶联二抗（如红色或紫色荧光）。

7. 封片与观察：使用DAPI染核后封片，通过激光共聚焦显微镜进行拍照分析。

为什么推荐爱必信（Absin）CTB-AF488？

高品质数据支持：该产品经过 mBio 等高水平期刊实验验证，荧光强度高，信噪比好，能够完美呈现共定位结果。

严格的特异性：特异性标记胞膜窖/脂筏途径，是区别于转铁蛋白（Clathrin途径）和葡聚糖（巨胞饮途径）的理想对照工具。

操作简便：直接加入培养基孵育即可，无需复杂预处理，简化实验流程。

应用广泛：不仅适用于病毒侵入机制研究，还广泛用于毒素内化、脂筏功能、信号转导及药物递送等多个领域。

高性价比：性能媲美进口，震撼性价比，可定制大规格及不同荧光素标记的CTB。

如果您正在从事病毒侵入、内吞机制或细胞信号转导的研究，爱必信（Absin）CTB系列产品将是您探索未知、验证假说的得力助手。正如这篇 mBio 文献所展示的，选择对的工具试剂，是发表高水平研究成果的重要基石。

引用文献：

Yang H, Li B, Yin X, Cristianto Pratama A, He F. ATP1A1 enhances porcine reproductive and respiratory syndrome virus type 2 attachment and internalization. mBio. 2026;17(4):e0389625. doi:10.1128/mbio.03896-25.